基于BDNF表達(dá)調(diào)控的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究甘草黃酮抗抑郁作用機(jī)制.pdf

1、本文對(duì)基于BDNF表達(dá)調(diào)控的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑 研究甘草黃酮抗抑郁作用機(jī)制進(jìn)行了研究。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分：
　　目的：研究甘草中的活性提取部位甘草總黃酮(licorice flavonoids，LF)的抗抑郁作用。
　　方法：將雄性SD大鼠60只，隨機(jī)分為正常組，模型組，甘草黃酮組（30，100，300 mg/kg，ig），陽(yáng)性藥物組（Fluoxetine3.5mg/kg，ig）各10只。除正常組外，其余各組

2、實(shí)施慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激刺激(chronic unpredictable stress，CUS)造模，共28天，期間灌胃給藥進(jìn)行干預(yù)。待實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，監(jiān)測(cè)體重變化，并進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)(OFT)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)（FST）、懸尾實(shí)驗(yàn)(TST)，并實(shí)施血清皮質(zhì)酮檢測(cè)，判斷甘草總黃酮的抗抑郁作用。
　　結(jié)果：⑴體重變化：應(yīng)激前各組大鼠體重差異無(wú)顯著性。應(yīng)激28天后，模型、氟西汀及3個(gè)甘草黃酮?jiǎng)┝拷M大鼠體重增長(zhǎng)幅度較正常對(duì)照組均有下降趨勢(shì)（P>0.05

3、）。⑵曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)：與模型組相比，甘草黃酮高中低劑量各組明顯增加了大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)水平穿格數(shù)（P<0.01）、降低曠場(chǎng)試驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生糞便數(shù)（P<0.01），甘草黃酮中低劑量組可增加直立次數(shù)。⑶強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的不動(dòng)時(shí)間：模型組大鼠不動(dòng)時(shí)間較正常對(duì)照組顯著延長(zhǎng)由50.44 s延長(zhǎng)至85.45 s（P<0.05）；與模型組相比，甘草黃酮各組劑量組大鼠的不動(dòng)時(shí)間較模型組大鼠均顯著縮短。⑷懸尾實(shí)驗(yàn)：與正常組相比，模型組懸尾不動(dòng)時(shí)間顯著增加（P<0.01）；

4、與模型組相比，甘草黃酮高中低劑量組懸尾不動(dòng)時(shí)間減少。⑸血清皮質(zhì)酮含量變化：造模第28天后，模型組大鼠血清皮質(zhì)酮含量明顯高于正常組（P＜0.05）；甘草黃酮高劑量組及氟西汀組均低于模型組（P＜0.01）。結(jié)論甘草總黃酮具有抗大鼠慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激模型引起的抑郁行為作用。
　　第二部分：
　　目的：采用慢性應(yīng)激動(dòng)物模型，結(jié)合行為學(xué)、血液生化實(shí)驗(yàn)明確甘草中的活性提取部位甘草總黃酮（licorice flavonoids，LF）的抗應(yīng)

5、激抑郁作用，并觀察甘草有效成分的時(shí)-效作用關(guān)系；采用分子生物學(xué)、免疫組織化學(xué)、免疫蛋白印跡等實(shí)驗(yàn)方法，探究甘草總黃酮的抗應(yīng)激抑郁作用與BDNF相關(guān)信號(hào)通路及其受體TrkB的關(guān)系。
　　方法：將雄性SD大鼠72只，隨機(jī)分為正常組，模型組，甘草黃酮組（100，300 mg/kg，ig），單純300 mg/kg劑量對(duì)照組（大鼠實(shí)施只灌胃給藥不進(jìn)行慢性刺激，簡(jiǎn)稱：300+），陽(yáng)性藥物組（10mg/kg）各12只。除正常組和300+外，其余

6、各組實(shí)施慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激刺激(chronic unpredictable stress model，CUS)造模，共28天，期間每天灌胃給藥，每周監(jiān)測(cè)一次體重及進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)(OFT)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)（FST）、懸尾實(shí)驗(yàn)(TST)用以評(píng)價(jià)藥物的干預(yù)效果。待實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，行烏拉坦(1.4g/kg，i.p.)麻醉后心尖取血，分離血清并采用ELISA方法檢測(cè)血清BDNF的變化；免疫組織化學(xué)方法測(cè)定海馬中BDNF、TrkB和pTrkB的蛋白含量；采用

7、western blot法測(cè)定BDNF的含量；qRT-PCR方法檢測(cè)BDNF、TrkB的mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴體重變化：與模型組相比，LF各組均能增加大鼠體重（P<0.05或P<0.01），與正常組相比300+組體重有所下降，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。⑵)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)：與模型組相比較，甘草總黃酮各組干預(yù)后，大鼠在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)直立次數(shù)增多（P<0.05，P<0.01）、穿格數(shù)增多（P<0.01）、理毛時(shí)間增多（P<0.01

8、）、糞便粒數(shù)減少。⑶強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)：與正常對(duì)相比，模型組強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間明顯增加（P<0.05，P<0.01）與模型組相比，甘草黃酮各組劑量組大鼠的不動(dòng)時(shí)間較模型組大鼠均顯著縮短。⑷懸尾實(shí)驗(yàn)：與正常組相比，模型組懸尾不動(dòng)時(shí)間顯著增加（P<0.01）；與模型組相比，甘草總黃酮各組懸尾不動(dòng)時(shí)間減少。⑸血清BDNF含量變化：與正常組比較，模型組大鼠血清中的BDNF含量明顯減少（P＜0.01）；與模型組相比，各治療組大鼠血清中BDNF含量增加。⑹

9、與正常組相比，模型組海馬 DG、CA1、CA3、Cortex區(qū) BDNF蛋白陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少，平均光密度值降低(P<0.05，P<0.01)；與模型組相比，各給藥組陽(yáng)性細(xì)胞均有所增多(P<0.05，P<0.01)，除甘草總黃酮100mg/kg組外各給藥組的平均光密度值也有所提高。⑺與正常組相比，模型組海馬DG、CA1、CA3、Cortex區(qū)TrkB蛋白陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少、平均光密度值降低(P<0.05，P<0.01)；與模型組相比，各

10、給藥組陽(yáng)性細(xì)胞均有所增多、平均光密度值也有所提高。⑻與正常組相比，模型組海馬DG、CA1、CA3、Cortex區(qū)pTrkB蛋白陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少、平均光密度值降低(P<0.01)；與模型組相比，除甘草總黃酮低劑量組有差異卻無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，各給藥組陽(yáng)性細(xì)胞均有所增多、平均光密度值也有所提高(P<0.05，P<0.01)，甘草總黃酮高劑量組效果較好(P<0.01)。⑼Western blot結(jié)果：與正常組相比，模型組大鼠海馬中BDNF蛋白含

11、量降低(P<0.01)，藥物治療后甘草總黃酮中高劑量組及陽(yáng)性藥物氟西汀組大鼠海馬中BDNF蛋白含量均有所增加。⑽qPCR結(jié)果：與正常組相比，模型組大鼠海馬中BDNF、TrkB的 mRNA表達(dá)降低(P<0.01)。與模型組相比，藥物干預(yù)后，各治療組大鼠海馬中BDNF、TrkB的 mRNA表達(dá)均有不同程度的增高(P<0.05，P<0.01)。
　　結(jié)論：甘草總黃酮具有抗大鼠慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激模型引起的抑郁行為作用機(jī)制可能與上調(diào)BDNF及