豐富環(huán)境對(duì)腦梗死大鼠行為學(xué)恢復(fù)及梗死灶周?chē)律?、VEGF、FLK-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：腦卒中是我國(guó)的常見(jiàn)病，發(fā)病率、致殘率高。腦卒中后康復(fù)的效果和重要性已得到肯定，腦卒中后神經(jīng)功能恢復(fù)的主要機(jī)制是腦的可塑性和功能重組，腦的可塑性受環(huán)境等外界因素的影響，有資料顯示豐富環(huán)境對(duì)腦卒中后神經(jīng)功能恢復(fù)及腦的可塑性有促進(jìn)作用，但其分子機(jī)制尚不完全清楚。腦血管閉塞以后，神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)歸受多種因素的影響，其中血供的恢復(fù)是重要因素。豐富環(huán)境干預(yù)是否通過(guò)促進(jìn)局灶性腦缺血后大鼠梗死灶周?chē)⒀苄律?，改善腦損傷后微循環(huán)，繼而促進(jìn)腦缺血后神經(jīng)功

2、能的恢復(fù)，尚不清楚。
　　 血管再生是一個(gè)極其復(fù)雜的過(guò)程，Hanahan等認(rèn)為血管形成過(guò)程受到”血管形成的開(kāi)關(guān)平衡”的調(diào)節(jié)，抑制因子濃度的下降，或生長(zhǎng)因子濃度的上升，均可使開(kāi)關(guān)處于開(kāi)放狀態(tài)，導(dǎo)致血管形成。VEGF是作用最強(qiáng)、特異性最高的成血管因子，需作用于特異性受體才能發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。在目前發(fā)現(xiàn)的多種VEGF受體（VEGFR）中，激酶插入嵌合受體/胎肝激酶-1（kinase insertdomain-containning r

3、eceptor/fetal liver kinase-1，KDR/flk-1）主要參與完成血管的新生，因此，研究豐富環(huán)境對(duì)局灶性腦缺血后大鼠梗死灶周?chē)⒀苄律挠绊?，可選擇VEGF、Flk-1作為標(biāo)志性指標(biāo)。
　　 本研究采用開(kāi)顱電凝法制作SD大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈梗塞（MCAO）模型，術(shù)后以豐富環(huán)境進(jìn)行干預(yù)，觀察豐富環(huán)境干預(yù)對(duì)腦梗死大鼠梗死灶周?chē)⒀苊芏燃癡EGF、FLK-1表達(dá)的影響，探討其可能的作用機(jī)制，旨在為臨床應(yīng)用豐富

4、環(huán)境進(jìn)行腦卒中康復(fù)治療提供基礎(chǔ)理論支持和指導(dǎo)。
　　 方法：健康雄性SD大鼠120只，其中80只用開(kāi)顱電凝法制作右側(cè)大腦中動(dòng)脈缺血（MCAO）模型后隨機(jī)分為豐富環(huán)境（EE）組和標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境（SE）組各40只；假手術(shù)組（Sham組）40只，不電凝大腦中動(dòng)脈，其余步驟與手術(shù)組相同。分別于術(shù)后1d、3d、7d、14d、28d進(jìn)行修訂的神經(jīng)功能評(píng)分（modified neurological severity scores，mNSS）；用光

5、鏡觀察各組大鼠右側(cè)大腦皮層的病理變化；運(yùn)用免疫組化SABC法檢測(cè)各組大鼠右側(cè)大腦皮層微血管密度的變化、VEGF及Flk-1的表達(dá)水平。所有數(shù)據(jù)均輸入計(jì)算機(jī)，以SPSS12.0軟件統(tǒng)計(jì)包處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示。
　　 結(jié)果：
　　 1.造模成功與否的判斷：術(shù)后24小時(shí)，手術(shù)組大鼠均出現(xiàn)明顯的偏癱體征，Berderson評(píng)分多為2分（其中1只1分，71只2分，8只3分）。假手術(shù)組大鼠無(wú)偏癱體征。
　　 2.

6、修訂的神經(jīng)功能評(píng)分（mNSS）：造模后1～7d各手術(shù)組評(píng)分差異無(wú)顯著性意義（P>0.05），于術(shù)后14～28d EE組mNSS運(yùn)動(dòng)和平衡單項(xiàng)評(píng)分及總分均明顯低于SE組（P<0.05），感覺(jué)、反射及不正常運(yùn)動(dòng)評(píng)分各組無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 3.微血管密度（Microvessel density，MVD）測(cè)定：SE組、EE組動(dòng)物14 d和28 d時(shí)梗死灶周?chē)梢?jiàn)較多散在的單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞，而Sham組動(dòng)物相應(yīng)部位僅見(jiàn)少量散在的單個(gè)內(nèi)皮

7、細(xì)胞。SE組、EE組大鼠術(shù)后14 d和28 d時(shí)梗死灶周?chē)⒀苡?jì)數(shù)明顯多于Sham組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而EE組28 d時(shí)梗死灶周?chē)⒀苡?jì)數(shù)明顯多于相應(yīng)時(shí)間的SE組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 4.VEGF：Sham組大鼠術(shù)后1～28 d均僅見(jiàn)極弱VEGF表達(dá)，SE組、EE組大鼠梗死灶周?chē)X組織在MCAO術(shù)后1d VEGF開(kāi)始表達(dá)，3 d達(dá)高峰，此后開(kāi)始減少，7 d時(shí)仍有表達(dá)，14 d時(shí)表達(dá)基本

8、恢復(fù)正常。3 d和7 d時(shí)EE組VEGF在缺血周邊區(qū)的表達(dá)明顯高于SE組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 5.Flk-1：EE組Flk-1從第1d開(kāi)始較SE組明顯增加（P<0.05），至第3d達(dá)高峰，表達(dá)持續(xù)至第7d后逐漸回落，到28d時(shí)表達(dá)仍較SE組明顯增強(qiáng)（p<0.05）。
　　 結(jié)論
　　 1.本研究采用開(kāi)顱電凝嗅束近端至大腦下靜脈之間一段MCA的方法，成功制作了大腦中動(dòng)脈分布區(qū)局灶性腦梗死模型。