人心房肌細(xì)胞腫脹激活的氯離子電流調(diào)節(jié)機(jī)制及分子結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)的研究.pdf

1、目的：Icl.swell（腫脹激活的氯離子電流，Swelling-activated chloride current）被認(rèn)為在心臟電生理及心律失常的發(fā)生過程中可能發(fā)揮重要作用，但其調(diào)節(jié)機(jī)制及分子結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)目前仍不清楚。我們通過全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)研究選擇性的α1受體激動劑新福林(Phenylephrine)，以及蛋白激酶C（PKC）激動劑PDBu(12,13-二丁酸佛波酯)對人心房肌細(xì)胞Icl.swell的影響。同時(shí)，采用PCR及免疫組織化

2、學(xué)技術(shù)，研究了目前認(rèn)為最可能介導(dǎo)Icl.swell的CLC-3蛋白在人右心房組織的表達(dá)特點(diǎn)及影響表達(dá)的相關(guān)因素，探討Icl.swell的調(diào)節(jié)機(jī)制及分子結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。 方法：電生理研究：取心臟手術(shù)患者右心房組織，膠原酶、蛋白酶消化分離出單個(gè)心房肌細(xì)胞，全細(xì)胞膜片鉗紀(jì)錄單細(xì)胞電流。通過低滲（0.6T）灌流液灌流使細(xì)胞腫脹得到Icl.swell，獲取給藥后達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)后的電流并分析。PCR和免疫組織化學(xué)研究：取33例心臟手術(shù)患者右心房組織

3、，RT-PCR檢測CLC-3 m-RNA，用與內(nèi)參β-actin m-RNA表達(dá)量的比值IOD CLC-3/IODβ-actin半定量；最小二乘法建立IOD CLC-3/IODβ-actin與性別，年齡，是否房顫，右房橫徑的多元線性回歸方程，方差分析檢驗(yàn)；免疫組化檢測CLC-3蛋白的表達(dá)，并觀察CLC-3蛋白在細(xì)胞的分布。 結(jié)果：在低滲（0.6T）灌流液灌流情況下，Icl.swell 被激活并被記錄到。新福林使Icl.swell

4、強(qiáng)度增強(qiáng)，這不同于以前在其他物種得到的結(jié)果。這種效應(yīng)為濃度依賴性，在+40mV，半數(shù)有效濃度EC50=9.8μM。加入150μM DIDS 或者用等滲灌流液灌流，該效應(yīng)即被逆轉(zhuǎn)。在預(yù)先加入1μM α1受體阻斷劑哌唑嗪的情況下，新福林依舊可以濃度依賴性增強(qiáng)Icl.swell，但增強(qiáng)程度減弱。Icl.swell也可以被PDBu所增強(qiáng)，明顯區(qū)別于CLC-3相關(guān)的氯離子電流被蛋白激酶C抑制的特性。 RT-PCR和免疫組化均可在右心房肌檢

5、測到CLC-3的表達(dá)，且CLC-3蛋白分布在細(xì)胞內(nèi)；建立的多元線性回歸方程各模型方差分析檢驗(yàn)均P>0.05，CLC-3 m-RNA的表達(dá)水平和性別、年齡、是否房顫、右房橫徑?jīng)]有相關(guān)性。 結(jié)論：①我們首次發(fā)現(xiàn)在人心房肌細(xì)胞新福林可以增強(qiáng)Icl.swell，這和在其他動物得到的結(jié)果不同，表明α1受體激動劑對Icl.swell的調(diào)節(jié)具有種屬特異性。②Icl.swell也可以被PDBu增強(qiáng)，這支持了α1受體激動劑可能是通過蛋白激酶C途徑