噻嗎洛爾滴眼液療效個(gè)體差異與CYP2D6單核苷酸多態(tài)的相關(guān)性研究.pdf

1、最近的研究顯示原發(fā)性開角型青光眼(Primary open-angle glaucoma，POAG)在我國(guó)的比例正逐步增加，有些研究甚至表明高于原發(fā)性閉角型青光眼(Primary angle-closure glaucoma，PACG)，這可能與診療水平和技術(shù)的不斷提高有關(guān)。隨著POAG人數(shù)的增多，因其所致的盲目的人數(shù)也會(huì)逐步增多。因而POAG的診斷和治療具有重要的臨床和社會(huì)意義。藥物治療仍然是POAG降眼壓的重要手段。國(guó)內(nèi)外的研究和我

2、們臨床工作中觀察發(fā)現(xiàn)抗青光眼藥物效應(yīng)存在明顯的個(gè)體差異，癥狀和病程相似的患者使用相同藥物的敏感性各不相同；在藥物不良反應(yīng)方面，仍然有小部分患者出現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)，導(dǎo)致治療的失敗，甚至危及生命。到目前為止，POAG發(fā)病原因和機(jī)理仍然不明確，病情隱匿，給診斷和治療增加了困難，這些特點(diǎn)決定了POAG個(gè)體化治療的重要性和必然性，只有實(shí)行個(gè)體化治療，才能使每位POAG患者獲得合適的、安全的治療。單核苷酸多態(tài)(SNP)的發(fā)現(xiàn)和SNP數(shù)據(jù)庫的建立，使

3、個(gè)體化用藥成為可能。藥物基因組學(xué)為個(gè)體化藥物治療的研究提供了研究工具。對(duì)SNP的深入研究發(fā)現(xiàn)：藥物代謝酶、藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體和DNA修復(fù)基因的SNP影響藥物的毒性和有效性，尤其是藥物代謝酶，如細(xì)胞色素氧化酶(P450)，這些研究基礎(chǔ)使SNP成為預(yù)測(cè)個(gè)體藥物反應(yīng)最有希望的指標(biāo)。SNP在個(gè)體化藥物治療研究中的應(yīng)用，如在精神病治療學(xué)、心血管治療學(xué)中日益廣泛。眼科用藥的個(gè)體化研究為數(shù)不多，尚在起步階段。 噻嗎洛爾(Timolol)作為我國(guó)治療P

4、OAG的主要藥物，存在明顯的個(gè)體差異。Timolol主要由相關(guān)代謝酶CYP2D6在肝內(nèi)代謝，此酶已經(jīng)被證實(shí)存在高度單核苷酸多態(tài)。同時(shí)在其他醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，如心血管治療學(xué)和精神病治療學(xué)中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這些酶的基因的單核苷酸多態(tài)和藥物療效的個(gè)體差異密切相關(guān)。本課題組前期對(duì)12個(gè)P450SNP位點(diǎn)使用基因芯片和SNP Stream微測(cè)序方法進(jìn)行篩選，初步得出CYP2D6rs16947和rs1135840可能與Timolol藥物反應(yīng)個(gè)體差異相關(guān)。為進(jìn)一步

5、明確CYP2D6rs16947和rs1135840與Timolol藥物反應(yīng)個(gè)體差異的相關(guān)性，為臨床用藥提供預(yù)測(cè)性的SNP指標(biāo)，本次研究增加研究對(duì)象數(shù)量，擴(kuò)大病人來源；改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法，即利用PCR-RFLP方法進(jìn)行基因分型，以進(jìn)一步探討兩者之間的聯(lián)系。 實(shí)驗(yàn)方法： 本研究共選取研究對(duì)象123例，均為POAG患者，單用0.5％Timolol滴眼液局部點(diǎn)眼控制眼壓。提取患者的全血基因組DNA，根據(jù)前期結(jié)果選取了CYP2D6的兩個(gè)

6、SNP位點(diǎn)即rsl6947和rsl 135840，利用PCR．RFLP的方法分析每個(gè)患者的基因型。根據(jù)各個(gè)基因型分別分組，即rsl6947分為CC、CT、TT三組，rs1135840分為GG、GC、CC三組。記錄每個(gè)研究對(duì)象用藥前眼壓和心率，以及用藥后24小時(shí)眼壓和心率，計(jì)算每個(gè)研究對(duì)象眼壓下降和心率下降值。根據(jù)方差分析得到每個(gè)SNP各組間眼壓下降和心率下降是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異和曬床差異。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1.Timolol藥

7、物療效個(gè)體差異Timolol的降眼壓作用在123個(gè)POAG患者中存在很大的個(gè)體差異，其最大降壓幅度為23mmHg，平均8.2+6.1 mmHg。心率下降幅度0~31bpm，平均下降4.4±8.2bpm。 2.遺傳平衡檢驗(yàn)應(yīng)用遺傳平衡定律檢測(cè)研究對(duì)象是否來自于隨機(jī)人群(表6)。 3.rs16947和rs1135840基因型在POAG患者中的分布對(duì)123例POAG患者采用PCR-RFLP基因分型檢測(cè)，其中CYP2D6 SNP

8、 rs16947位點(diǎn)123例，rs1135840位點(diǎn)101例。各位點(diǎn)基因型在POAG患者中的分布見下述。 3.1 rsl6947(2850C＞T，R296C)基因頻率C=0.8537(210／246)，T=0.1463(36／246)； 基因型頻率CC=0.7317(90／123)，TC=0.2439(30／123)，TT=0.0244(3／123)。 3.2 rs1135840(4180C＞G，S486T)基因

9、頻率G=0.3218(65／202)，C=0.6782(137／202)； 基因型頻率GG=0.1287(13／101)，GC=0.3861(39／101)，CC=0.4851(49／101)。 4.使用噻嗎洛爾滴眼液24小時(shí)后各基因型眼壓改變比較在rs16947各基因型中，眼壓下降：CC組8.5~6.1mmHg、CT組8.04±6.3mmHg、TT組3.3±1.2mmHg。三組資料用方差分析得到F值為1.092，P值為

10、0.339，說明三組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 在rs1135840各基因型中，眼壓下降：GG組7.74±6.2mmHg、GC組8.5+6.5mmHg、CC組為8.04±5.8mmHg。三組資料用方差分析得到F值0.103，P值為0.903，說明三組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 5.使用噻嗎洛爾滴眼液24小時(shí)后各基因型心率改變比較在rs16947各基因型中，心率下降：CC組3.14±7.4次份鐘、CT組為6.74±9.1次分鐘、TT組13.3

11、±7.1汐汾鐘。三組資料用方差分析，得到P值為0.021，三組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。CC組與CT組比較P為0.043，CC組與TT組比較P為0.035，CT組與TT組比較尸為0.177。 在rs1135840各基因型中，心率下降：GG組1.34±7.0次份鐘、GC組5.04±8.9次／分鐘、CC組3.6±8.0/分鐘。三組資料用方差分析，得到P值為0.529，說明三組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論： 本課題組前期在國(guó)內(nèi)首次研究

12、P450 SNP與主要抗青光眼藥物Timolol藥物反應(yīng)個(gè)體差異的相關(guān)性，得出CYP2D6 SNP rs16947(2850C＞T，R296C)和CYP2D6 SNP rs1135840(4180C＞G，S486T)兩個(gè)SNP可能與Timolol藥物療效存在相關(guān)性。本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步增加樣本量，同時(shí)改變實(shí)驗(yàn)方法，得出以下結(jié)論： 1.CYP2D6 SNPrs16947(2850C＞T，R296C)可能與Timolol