生長(zhǎng)阻滯羅氏沼蝦相關(guān)激素含量及其基因的表達(dá).pdf

1、近年來(lái)，揚(yáng)州市高郵區(qū)域部分羅氏沼蝦(Macrobrachium rosenbergii)養(yǎng)殖塘口出現(xiàn)“生長(zhǎng)緩慢”癥狀，蝦農(nóng)統(tǒng)稱為“鐵殼蝦”，“鐵殼蝦”現(xiàn)象凸顯，給蝦農(nóng)帶來(lái)了一定的經(jīng)濟(jì)損失和巨大的精神壓力。國(guó)內(nèi)學(xué)者從多方面對(duì)其進(jìn)行了研究，但是，迄今為止，對(duì)于引起羅氏沼蝦生長(zhǎng)阻滯現(xiàn)象的主要原因仍無(wú)定論。羅氏沼蝦作為甲殼動(dòng)物，其生長(zhǎng)伴隨著蛻殼的過(guò)程，而蛻殼受到蛻殼激素的影響，生長(zhǎng)阻滯的羅氏沼蝦有可能存在激素水平的異常，而與激素相關(guān)的基因表達(dá)也

2、可能表現(xiàn)出不同。因此，本論文假定，生長(zhǎng)阻滯羅氏沼蝦的激素含量及其相關(guān)基因的表達(dá)完全不同于生長(zhǎng)正常的羅氏沼蝦。為了驗(yàn)證上述假說(shuō)，本論文以高郵區(qū)域人工飼養(yǎng)的羅氏沼蝦為研究對(duì)象，首先測(cè)定采集樣本個(gè)體的形態(tài)學(xué)參數(shù)，采用不同的數(shù)學(xué)統(tǒng)計(jì)方法對(duì)各形態(tài)學(xué)參數(shù)進(jìn)行分析，確定鑒定羅氏沼蝦生長(zhǎng)阻滯個(gè)體的最佳統(tǒng)計(jì)學(xué)方法和最佳度量的參數(shù);然后按照以上確定的最佳參數(shù)對(duì)不同的樣本進(jìn)行分類，對(duì)分類個(gè)體進(jìn)行蛻皮時(shí)期的判別，選擇蛻皮間期的羅氏沼蝦，通過(guò)酶聯(lián)免疫法測(cè)定各類樣

3、本中蛻皮激素、蛻皮抑制激素和甲基法尼酯的含量，通過(guò)熒光定量PCR測(cè)定各類樣本的肝胰腺和眼柄中生長(zhǎng)相關(guān)基因的mRNA表達(dá)水平，通過(guò)Western Blot測(cè)定各類樣本的肝胰腺和眼柄中EcR蛋白的表達(dá)，探討各類激素及其相關(guān)基因在生長(zhǎng)阻滯現(xiàn)象中的作用，揭示影響水生甲殼類動(dòng)物生長(zhǎng)的生理調(diào)控機(jī)制，為廣大養(yǎng)殖戶的健康養(yǎng)殖提供可能的新措施和新方法。研究結(jié)果如下:
　　1)聚類分析中能夠?qū)颖緞澐譃檎Ｎr、正常幼蝦和阻滯蝦的參數(shù)有體重、肥滿度和第

4、一尾節(jié)寬度/體長(zhǎng);主成分分析中能夠區(qū)分三類蝦的參數(shù)有體長(zhǎng)、腹尾長(zhǎng)、螯長(zhǎng)、第一尾節(jié)寬度、體長(zhǎng)/體重、腹尾長(zhǎng)/體重;相關(guān)性分析中能夠區(qū)分三類蝦的參數(shù)有體重、體長(zhǎng)、腹尾長(zhǎng)、第一尾節(jié)寬度、體長(zhǎng)/體重、腹尾長(zhǎng)/體重。綜合分析認(rèn)為，聚類分析是最佳統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，體重、肥滿度和第一尾節(jié)寬度/體長(zhǎng)3個(gè)參數(shù)是最佳統(tǒng)計(jì)學(xué)參數(shù)。區(qū)分正常蝦、正常幼蝦和阻滯蝦的參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)為:雄性體重參數(shù)范圍22.1668～25.1034、17.0517～17.6608和13.4706

5、～14.214，雄性肥滿度參數(shù)范圍1.1598～1.2127、1.2541～1.2640和1.1274～1.1556，雄性第一尾節(jié)寬度/體長(zhǎng)比值參數(shù)范圍0.1294～0.1360、0.1363～0.1384和0.1435～0.1494;雌性體重參數(shù)范圍18.1526～19.9768、13.2198～14.0242和11.1046～11.9157，雌性肥滿度參數(shù)范圍1.1332～1.1563、1.1873～1.2075和1.1010～1.

6、1107;雌性第一尾節(jié)寬度/體長(zhǎng)比值參數(shù)范圍0.1327～0.1376、0.1392～0.1414和0.1415～0.1441。
　　2)2015年8月采集的樣本中，雄性阻滯蝦20E水平顯著低于正常蝦(P＜0.05)，雌性阻滯蝦20E水平顯著低于正常蝦和正常幼蝦(P＜0.05);雌性阻滯蝦MIH水平顯著高于正常蝦和正常幼蝦(P＜0.05);雌雄阻滯蝦MF水平均顯著低于正常蝦(P＜0.05)。2016年6月采集的樣本中，雄性阻滯蝦2

7、0E水平顯著低于正常蝦和正常幼蝦（P＜0.05），雌性阻滯蝦20E水平顯著低于正常蝦(P＜0.05);雌雄阻滯蝦MIH水平均顯著高于正常蝦和正常幼蝦（P＜0.05）;雌性阻滯蝦MF水平顯著低于正常蝦和正常幼蝦(P＜0.05)。
　　3)2015年8月采集的樣本中，雄性阻滯蝦肝胰腺中的EcR mRNA表達(dá)量顯著低于正常蝦(P＜0.05)，MIH mRNA表達(dá)量顯著高于正常蝦和正常幼蝦(P＜0.05)，RxR mRNA表達(dá)量顯著低于正

8、常蝦和正常幼蝦（P＜0.05），雄性阻滯蝦眼柄中的MIH mRNA表達(dá)量顯著高于正常幼蝦(P＜0.05);雌性阻滯蝦肝胰腺中的EcR mRNA表達(dá)量顯著低于正常蝦和正常幼蝦（P＜0.05），JHEH mRNA表達(dá)量顯著高于正常幼蝦，MIH mRNA表達(dá)量顯著高于正常蝦和正常幼蝦（P＜0.05）。2016年6月采集的樣本中，雄性阻滯蝦肝胰腺中的EcR和RxR mRNA表達(dá)量均顯著低于正常蝦和正常幼蝦(P＜0.05)，GIH、 MIH和JH

9、EH mRNA表達(dá)量均顯著高于正常蝦和正常幼蝦(P＜0.05)，雄性阻滯蝦眼柄中的GIH和MIH mRNA表達(dá)量顯著高于正常蝦和正常幼蝦(P＜0.05);雌性阻滯蝦肝胰腺中的EcR和RxR mRNA表達(dá)量顯著低于正常蝦和正常幼蝦(P＜0.05)，GIH和MIH mRNA表達(dá)量顯著高于正常蝦和正常幼蝦(P＜0.05)，JHEH mRNA表達(dá)量顯著高于正常幼蝦(P＜0.05)，雌性阻滯蝦眼柄中的GIH和MIH mRNA表達(dá)量顯著高于正常蝦和

10、正常幼蝦(P＜0.05)。
　　4)2015年8月采集的樣本中，雌性阻滯蝦和正常幼蝦眼柄中的EcR含量顯著低于正常蝦(P＜0.05)。2016年6月采集的樣本中，雄性阻滯蝦肝胰腺中的EcR含量顯著低于正常蝦(P＜0.05);雌性阻滯蝦眼柄中的EcR含量顯著低于正常蝦（P＜0.05）。
　　以上結(jié)果表明，聚類分析、主成分分析和相關(guān)性分析均可區(qū)分生長(zhǎng)阻滯羅氏沼蝦，聚類分析是區(qū)分的最佳統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，而體重、肥滿度和第一尾節(jié)寬度/體長(zhǎng)