抗凍蛋白基因的克隆及其在羅氏沼蝦中的整合.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該研究的特色和創(chuàng)新之處在于,針對羅氏沼蝦不耐低溫,但體型相對較大,精莢明顯的特點,首次將目前已知具有最強抗凍活性的云杉卷葉蛾(spruce budworm,Choristoneura fumiferana)抗凍蛋白(sbwAFP)基因(sbwAFP),通過精子介導的轉基因技術整合到羅氏沼蝦的胚胎中,以期培育出耐低溫的羅氏沼蝦新品系.這不僅對羅氏沼蝦的遺傳育種工作是一個重大的突破,而且對帶動和促進其它蝦、蟹類等水生經濟動物轉基因育種工作的

2、開展,改變中國目前的養(yǎng)殖結構,降低生產成本,促進現代養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展,提高經濟效益,都具有重要的意義.該研究采用重疊序列延伸法獲得sbwAFP,經PCR擴增后,將其插入到質粒載體pCMV-EGFP-SV40UTR中,置于細胞肥大病毒啟動子(CMVp)和增強綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)cDNA(EGFP)之間,構建了表達載體pCMV-sbwAFP-SV40UTR.通過精莢微注射

3、(spermatophoremicroinjection,SMI)——一種精子介導的轉基因技術導入羅氏沼蝦,即將外源DNA直接注射入羅氏沼蝦的精莢.其后的受精及卵的孵化均在正常條件下完成.以sbwAFP首尾兩端的特異序列為引物,PCR分析SMI獲得的蝦胚胎的基因組DNA,有試樣可得一308bp的擴增產物,與sbwAFP的大小相符,而僅注射PBS和未注射的陰性對照蝦胚胎沒有擴增條帶,說明SMI獲得的蝦胚胎基因組中確有sbwAFP的整合.從

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