斑蝥素干預(yù)急性髓細(xì)胞性白血病端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)甲基化的研究.pdf

1、提丑石弓丈目的:研究中藥提取物斑鰲素對(duì)端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)甲基化的影響，以期闡明斑鰲素對(duì)h1王R丁是否存在去甲基化治療作用，探討斑鰲素治療急性髓細(xì)胞性白血病的作用機(jī)制。方法:采用Hl。一60細(xì)胞株，注入經(jīng)6OeoZooeGy輻射后的NoDselD小鼠體內(nèi)，建立NODsCID小鼠一人急性白血.病模型，分為實(shí)驗(yàn)組和空白組，實(shí)驗(yàn)組應(yīng)用斑鰲素進(jìn)行二廠預(yù)。RT~PCR法觀察空白組和實(shí)驗(yàn)組hTERTmRNA的表達(dá)，MSP法觀察空白組和實(shí)驗(yàn)組

2、h丁ERI甲基化狀態(tài)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果:空白組和實(shí)驗(yàn)組經(jīng)肝、脾、股骨病理證實(shí)造模成功斑鰲素能明顯延長(zhǎng)白血病模型小鼠的生存時(shí)間(P0.01)，并對(duì)小鼠外周白細(xì)胞影響明顯(P0.01):斑鰲素能明顯下調(diào)hTERTrnRNA的表達(dá)(P0.01)但空白組和實(shí)驗(yàn)組均存在hTERT甲基化。結(jié)論:斑鰲素能夠下調(diào)hTERrrmRNA的表達(dá)定性MSP未能證實(shí)斑鰲素對(duì)hTERT啟動(dòng)子產(chǎn)生明顯去甲基化治療作用，尚需采用實(shí)時(shí)一熒光定量MSP進(jìn)一步研究。關(guān)鍵

3、詞斑鰲素急性髓細(xì)胞性白血病端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶甲基化逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)多目錄擊一曰己J實(shí)驗(yàn)研究...............................……，.......……、.....................................................................……2一、實(shí)驗(yàn)材料....................................……，.

4、................................................................……2(一)主要儀器.........................................................................................................……2(二)主要試劑........……，.............……，....

5、......................................................................……2二、主要溶液的配制方法…，.............……，...........……，，……4(一)DEPC水的配制.............……，......……，.……、.......................................................……4(二

6、)無RNA酶水的配制..............……，...........................……，.................................……4(三)RPMI一1640培養(yǎng)基配偉!J..…，.......................................................................……‘..…4(四)凍存液配制..................

7、...............……，……4(五)磷酸鹽緩沖液(PBS)....……，...................……，..............……，..…，.....................……4(六)無RNA酶75%乙醇的配制…_.……，二甲二_.…，二，.....……，..…，，二_............................……4(七)電泳緩沖液的配制.......……，.............

8、.................................................................……4三、實(shí)驗(yàn)方法.…，.......……，................................……，.......................................................……5(一)NODSCID小鼠............................

9、...............................................................……，.…5(二)HL一60細(xì)胞培養(yǎng)...................................……，......................................................……5(三)細(xì)胞的凍存....................................

10、...................................……，.........................……5(四)細(xì)胞復(fù)蘇............................................................................................................……5(五)細(xì)胞濃度調(diào)整.....……，...................

11、....................................................................……5(六)斑鰲素的配制及應(yīng)用....……，..……，....................................................................……6(七)NODSCID小鼠預(yù)處理及造模......……，...........................

12、................................……6(八)一般情況記錄....................................................................................................……6(九)，骨髓涂片.................……卜............................……，..............

13、...................................……6(十一)病理....……，...........................................................……，......................................……6(十一)外周血常規(guī).........................................……，.....……7(一t一二