BMSCs-Pluronic F-127水凝膠復(fù)合體移植治療椎間盤退變的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）復(fù)合溫敏性水凝膠Pluronic F-127移植治療椎間盤髓核缺損退變的效果，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：取6只1月齡的健康新西蘭白兔，雌雄不限，取骨髓2 ml，分離培養(yǎng)BMSCs。取第3代BMSCs，用Lentivirus-GFP慢病毒標(biāo)記第三代BMSCs。在低溫下配制PluronicF-127水溶液，進(jìn)行

2、GFP-BMSCs-Pluronic F-127復(fù)合物的制備。將24只動物建立兔椎間盤髓核缺損退變模型，并隨機(jī)分為4組（n=6）：正常對照組僅分離暴露椎間盤，不作任何處理：移植治療組將25μLGFP-BMSCs-Pluronic F-127水凝膠復(fù)合體注射入缺損椎間盤中心；干細(xì)胞組將25μLGFP-BMSCs注射入缺損椎間盤中心；缺損退變組僅注射入0.01 mol/LPBS液25μl。移植后8周處死動物，取出脊柱行MRI檢測，測量各椎間

3、盤的信號強(qiáng)度和鄰近椎旁肌肉的信號強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)差，計(jì)算信號/噪聲比（signal-noise ratio，SNR）；取出相應(yīng)椎間盤行翻紅O固綠染色及Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色，切片行灰度值測定和分光光度計(jì)測定蛋白多糖含量。熒光顯微鏡觀察髓核組織內(nèi)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分布情況。
　　 結(jié)果：4組椎間盤信噪比（signal-noise ratio，SNR）比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。翻紅O固綠染色示：正常對照組及移植治療組椎間盤

4、染色明顯，椎間盤結(jié)構(gòu)清晰；干細(xì)胞椎間盤結(jié)構(gòu)尚可；缺損退變組椎間盤結(jié)構(gòu)紊亂，髓核組織和外周纖維環(huán)分界不清。移植治療組Ⅱ型膠原和蛋白多糖的含量明顯較缺損退變組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但與正常對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在熒光顯微鏡下仍能觀察到綠色熒光，細(xì)胞呈團(tuán)塊狀，分布不均。
　　 結(jié)論：移植的間充質(zhì)干細(xì)胞能夠在髓核內(nèi)存活，與Pluronic F-127水凝膠復(fù)合體可修復(fù)椎間盤缺損退變