SDF-1α復合Pluronic F-127對BMSCs體外誘導成骨的實驗觀察.pdf

1、目的：以Pluronic F-127為支架材料,構建裝載基質細胞衍生因子-1α(stromal cell derived factor-1α,SDF-1α)的Pluronic F-127新型復合材料,探討其對大鼠骨髓間充質干細胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)的體外趨化作用,并將Pluronic F-127與BMSCs復合培養(yǎng),觀察兩者間生物相容性,進而研究復合SDF-1α水凝膠對BMSCs誘導分化成成

2、骨細胞的影響。
　　研究方法：構建裝載不同濃度SDF-1α(200、50 ng/ml)的Pluronic F-127復合水凝膠,采用Transwell小室法進行復合水凝膠對BMSCs的體外趨化實驗,通過對遷移BMSCs的計數與統(tǒng)計分析,篩選出趨化作用較好的復合水凝膠。將BMSCs與篩選出的復合水凝膠均勻混合培養(yǎng),用MTT法檢測復合培養(yǎng)后細胞的活性狀況。將BMSCs與篩選出的復合水凝膠混合均勻,待凝膠形成后加成骨誘導液進行培養(yǎng),同時

3、分別設置單純BMSCs的成骨誘導液培養(yǎng)和完全培養(yǎng)基培養(yǎng),對以上各行堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性測定及茜素紅染色,觀察并記錄各檢測結果,分析各BMSCs的成骨誘導分化情況。
　　結果：趨化結果顯示,含SDF-1α濃度為200 ng/ml的復合水凝膠對BMSCs的募集效果顯著,與含SDF-1α濃度為50 ng/ml的復合水凝膠相比,其趨化下室濾膜表面的細胞轉移數目明顯增多(P<0.05)。MTT法

4、證實Pluronic F-127對細胞增殖不產生影響,BMSCs-水凝膠復合培養(yǎng)與單純BMSCs培養(yǎng)相比,兩者間細胞活性差異并無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。AKP活性測定表明,BMSCs-復合水凝膠、單純BMSCs在成骨誘導培養(yǎng)條件下,兩者中細胞的AKP表達量均明顯增高,并且都高于非成骨誘導組(P<0.05),同時經成骨誘導液培養(yǎng)的細胞,在鏡下均可見明顯的橘紅色鈣結節(jié)團塊,而非加成骨誘導液培養(yǎng)的細胞,鏡下則未見鈣結節(jié)形成。
　　結