Bmi1在肝卵圓細胞擴增及肝癌發(fā)生中的作用.pdf

1、研究目的:研究表明多梳家族成員中的Bmi1蛋白調節(jié)多種類型干祖細胞的自我更新和增殖,介導多種癌癥的發(fā)生。然而它在肝臟干祖細胞增殖和肝癌發(fā)生中的作用和作用機制尚未被闡明清楚。本研究旨在闡明Bmi1在肝臟再生和肝癌發(fā)生中的作用。
　　研究方法:1)利用Bmi1GFP/+基因敲入小鼠,結合DDC誘導肝卵圓細胞擴增模型,確定Bmi1在肝卵圓細胞中的表達情況。2)利用Bmi1-/-基因敲除小鼠,結合DDC誘導肝卵圓細胞擴增模型,確定 Bmi

2、1在肝卵圓細胞擴增中的作用。3)利用Bmi1-/-基因敲除小鼠,結合部分肝臟切除手術,確定Bmi1對肝細胞增殖的影響。4)在方法2)的基礎上,結合抗氧化劑NAC處理,確定ROS通路對Bmi1-/-基因敲除小鼠肝卵圓細胞擴增的影響。5)通過Bmi1-/-小鼠和Ink4a/Arf-/-小鼠多代雜交,得到Bmi1-/-;Ink4a/Arf-/-雙基因敲除小鼠,再結合DDC誘導的肝卵圓細胞擴增模型,確定Bmi1對小鼠肝卵圓細胞的影響是否通過In

3、k4a/Arf通路介導。6)通過高壓注射轉染方法,對Bmi1-/-小鼠轉染AKT/Ras癌基因,觀察肝癌發(fā)生是否受到抑制。
　　研究結果:1)Bmi1在肝卵圓細胞中表達。2)Bmi1+/+小鼠經(jīng)DDC誘導后肝卵圓細胞大量擴增,而Bmi1基因敲除小鼠經(jīng)DDC誘導后不見肝卵圓細胞擴增。因此,Bmi1是肝卵圓細胞擴增所必須的。3)Bmi1-/-小鼠在部分肝臟切除術后不能存活,用比較兩周齡Bmi1+/+和Bmi1-/-小鼠肝細胞增殖能力的

4、方法,結果為Bmi1不影響肝細胞的增殖。4)NAC處理后,Bmi1-/-小鼠仍不見肝卵圓細胞擴增,證明Bmi1對肝卵圓細胞的作用不由ROS通路介導。5)Bmi1-/-;Ink4a/Arf-/-雙基因敲除小鼠的肝卵圓細胞大量擴增,證明Bmi1對肝卵圓細胞的擴用通過Ink4a/Arf通路介導。6)通過高壓注射轉染AKT/Ras,Bmi1+/+小鼠在4-6周內發(fā)展成肝卵圓細胞來源的肝細胞肝癌和膽管癌混合型肝癌,但 Bmi1-/-小鼠在8周后仍