HBVX基因誘導(dǎo)肝卵圓細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化.pdf

1、目的：研究HBx基因?qū)Ω温褕A細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響，為HBx基因誘導(dǎo)卵圓細(xì)胞轉(zhuǎn)分化成肝癌細(xì)胞的機(jī)制提供初步理論依據(jù)。
　　 方法：以穩(wěn)定表達(dá)HBx的轉(zhuǎn)基因卵圓細(xì)胞株pEGFP-HBx卵圓細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組，pEGFP卵圓細(xì)胞及LE/6卵圓細(xì)胞為對(duì)照組，運(yùn)用透射電鏡、流式細(xì)胞術(shù)、PAS染色、集落形成試驗(yàn)、Realtime-PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)pEGFP-HBx卵圓細(xì)胞在細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞周期、分化標(biāo)志物、癌基因c-myc及TGF-ɑ表達(dá)變化。

2、
　　 結(jié)果：(1）pEGFP-HBx卵圓細(xì)胞體積增大，核具有明顯異形性；(2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示與對(duì)照組相比，pEGFP-HBx卵圓細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞百分比下降，S期和G2/M期細(xì)胞百分比明顯升高，而且非整倍體細(xì)胞明顯增多；（3）PAS染色顯示pEGFP-HBx卵圓細(xì)胞胞漿內(nèi)可見(jiàn)大量糖原顆粒；（4）軟瓊脂中可見(jiàn)pEGFP-HBx卵圓細(xì)胞克隆集落形成；（5）癌基因c-myc及TGF-ɑ表達(dá)量明顯增高，卵圓細(xì)胞分化指標(biāo)HNF-4