貧鈾誘導(dǎo)BEAS-2B細胞惡性轉(zhuǎn)化前后差異表達基因的篩選.pdf

1、實驗?zāi)康?闡明難溶性貧鈾氧化物致BEAS-2B細胞惡性轉(zhuǎn)化的分子機制,為貧鈾的危害及其防治提供有益的線索.實驗方法:主要采用抑制消減雜交、cDNA轉(zhuǎn)化重組技術(shù)和DNA測序方法分析比較了難溶性貧鈾氧化物誘發(fā)人永生化支氣管上皮細胞BEAS-2B細胞惡性轉(zhuǎn)化前后差異表達基因的表達情況.主要結(jié)果如下:1運用LD-RTPCR(長片斷反轉(zhuǎn)錄和線性PCR擴增)方法和cDNA轉(zhuǎn)化重組技術(shù),檢測了BEAS-2B細胞和DU-BEAS-2B(惡性轉(zhuǎn)化后18代

2、)相關(guān)基因的表達差異;利用SSH技術(shù)構(gòu)建了BEAS-2B細胞惡性轉(zhuǎn)化前后的差異表達基因文庫,對文庫中cDNA克隆進行單向測序:623個有插入片段的克隆共代表444個不同基因.推論:;兩個差減文庫的cDNA可能代表了DU誘發(fā)人永生化支氣管上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化前后差異表達的基因,此為進一步研究DU誘發(fā)惡性化病變發(fā)生的分子機制奠定了基礎(chǔ).2對623個克隆測序結(jié)果進行了同源性比較、功能預(yù)測等相應(yīng)的生物信息學(xué)分析,并參考國際互聯(lián)網(wǎng)上相關(guān)的數(shù)據(jù)庫進行了

3、相應(yīng)的比較和分析,探討了差異表達基因的功能和意義,其中有癌基因、抑癌基因、細胞生長代謝相關(guān)基因、細胞周期調(diào)控基因、轉(zhuǎn)錄因子、免疫相關(guān)基因、細胞信號傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)運蛋白相關(guān)基因等重要基因,26個未知序列中可能包括含有與細胞惡性轉(zhuǎn)化相關(guān)的重要基因,并有可能存在一些首次發(fā)現(xiàn)的與肺癌和細胞惡性轉(zhuǎn)化發(fā)生相關(guān)的新基因,這有待于我們進一步驗證,這些基因也是我們進行基因功能研究的重要候選基因.為進一步研究DU誘發(fā)BEAS-2B細胞惡性轉(zhuǎn)化發(fā)生、發(fā)展的分子機制