梓醇凍干粉針的處方工藝研究及藥代動(dòng)力學(xué)考察.pdf

1、腦缺血性疾病嚴(yán)重危害人類健康，如何通過藥物防治腦缺血損傷成為國內(nèi)外關(guān)注熱點(diǎn)。研究表明，中藥地黃單體梓醇能顯著改善腦缺血性疾病，但目前尚未有梓醇制劑的相關(guān)報(bào)道。 目的： 研制梓醇的凍干粉針劑型，確定其處方和成型工藝；建立大鼠血清和腦脊液中梓醇的含量測定方法；考察梓醇凍干粉針劑和梓醇單體在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)規(guī)律有無差異性及腦脊液中梓醇的分布情況，以驗(yàn)證處方和工藝的合理性。 方法： 1.梓醇凍干粉針的處方及工

2、藝研究 1.1,水溶液中梓醇含量測定方法的確定 色譜柱為Hypersil C18（250mm×4.0mm，5μm）；預(yù)柱為C18（10mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：0.1％磷酸溶液-乙腈（99：1，V/V）；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣量：20μl；檢測波長：210nm。在該色譜條件下進(jìn)行水溶液中梓醇含量測定并繪制其標(biāo)準(zhǔn)曲線、精密度、重復(fù)性、回收率等方法學(xué)考查及其穩(wěn)定性試驗(yàn)。 1.2,處方及工藝研究

3、 梓醇（主藥），甘露醇、甘氨酸及海藻糖（為賦形劑），10％氫氧化鈉溶液（為pH調(diào)節(jié)劑），注射用水。測定的溶液低共熔點(diǎn)；根據(jù)其測定值選擇不同的凍干條件，繪制凍干曲線。根據(jù)其凍干曲線確定最佳凍干條件。選擇其成品外觀色澤、成型性、水溶性、澄明度、梓醇含量等為梓醇凍干粉針的考查指標(biāo)。 2.梓醇凍干粉針的藥代動(dòng)力學(xué)及腦脊液中含量的考察 2.1,血清和腦脊液中梓醇凍干粉針分析方法的確定 色譜條件（柱為Hypersil C1

4、8（250mm×4.0mm，5μm）；預(yù)柱為C18（10mm×4.6mm，5μm）；柱溫：40℃；流動(dòng)相為水-乙腈（99.5：0.5，V/V）；流速為1.0ml/min；進(jìn)樣量為20μl；檢測波長為210nm。在該色譜條件下進(jìn)行梓醇凍干粉針的標(biāo)準(zhǔn)曲線、精密度、絕對回收率、方法回收率及樣品凍存穩(wěn)定性試驗(yàn)。 2.2,藥代動(dòng)力學(xué)研究 健康SD大鼠10只，隨機(jī)分為梓醇組和梓醇凍干粉針組，每組5只。分別按大鼠5.0mg/kg尾靜脈

5、注射1.0mg/ml梓醇生理鹽水和梓醇凍干粉針生理鹽水；給藥后于1min、5min、15min、30min、45min、90min、120min、240min、420min、600min分別從大鼠眼眶靜脈叢采血0.5ml，測定梓醇的血藥濃度。將所獲得的數(shù)據(jù)整理，用中國藥理學(xué)會(huì)數(shù)學(xué)藥理專業(yè)委員會(huì)編制的3P97實(shí)用藥代動(dòng)力學(xué)計(jì)算程序分析計(jì)算，得到梓醇和梓醇凍干粉針劑在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。 2.3,腦脊液中梓醇含量的考察

6、 健康SD大鼠10只，隨機(jī)分為梓醇組和梓醇凍干粉針組，每組5只。分別按大鼠5.0mg/kg尾靜脈注射1.0mg/ml梓醇生理鹽水和梓醇凍干粉針生理鹽水，40min后，經(jīng)蛛網(wǎng)膜下腔抽取腦脊液0.1ml，按上述方法測定其藥物濃度及數(shù)據(jù)處理。 結(jié)果： 1.梓醇凍干粉針的處方及工藝研究 1.1,梓醇在水溶液中的含量測定方法確定 在前述色譜條件下，梓醇的峰形良好，無雜質(zhì)峰干擾，樣品中梓醇的理論塔板數(shù)大于9000，保

7、留時(shí)間約為5.9min，與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5。由其標(biāo)準(zhǔn)曲線可得：梓醇水溶液在5.0～70μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。線性回歸方程為：y=4.0139x+1.8369（r=0.9999）。最低檢出限量為0.3μg/ml?；厥章蕿?00.22％，精密度、重復(fù)性RSD均小于2％。梓醇凍干粉針?biāo)芤涸诔亍⒊合拢?小時(shí)內(nèi)含量無明顯變化，樣品在水溶液中8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。 1.2,處方及工藝研究 處方與制備：精密稱取

8、梓醇10g，甘露醇100g，海藻糖50g，加適量注射用水，使溶解。加10％氫氧化鈉溶液約150ml使溶液pH6.8～7.0，加注射用水至2000ml，分裝成1000瓶。 冷凍干燥條件：本品的低共熔點(diǎn)為-20℃，采用速凍法，在-40℃下預(yù)凍3h；升華干燥階段抽真空至1～3Pa，緩慢將板溫升至-24℃，用時(shí)3h，保溫9h；解析干燥階段緩慢將板溫升至40℃，用時(shí)3h，保溫8h，冷凍干燥結(jié)束，得白色疏松塊狀，成型性好，水分2.7％。得符

9、合要求的成品。 2.梓醇凍干粉針的藥代動(dòng)力學(xué)及腦脊液中含量的考察 2.1,血清和腦脊液中梓醇分析方法確定 血清中梓醇分析方法確定：在前述色譜條件下，血清中梓醇的峰形良好，無雜質(zhì)峰干擾。血清中梓醇的理論塔板數(shù)大于8000，保留時(shí)間為10.3min，與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5。由其標(biāo)準(zhǔn)曲線可得：血清中梓醇濃度在0.5～60μg/ml濃度范圍線性關(guān)系良好。線性回歸方程為y=5376.4x+859.1（r=0.99

10、96）。最低檢出限量為0.3μg/ml。測得低、中、高濃度絕對回收率為（88.02±2.21）％、（87.36±3.14）％、（89.80±0.08）％；方法回收率為（99.32±1.71）％、（99.87±1.71）％、（100.09±1.26）％；日內(nèi)、日間精密度RSD均小于6％。在-20℃下冷凍保存15d，低、中、高濃度組樣品濃度分別為（4.98±0.12）μg/ml、（19.98±0.35）μg/ml、（39.97±1.19）μ

11、g/ml，含量無明顯變化（P>0.05），樣品在此凍存條件下15d內(nèi)穩(wěn)定。 腦脊液中梓醇分析方法確定：腦脊液中梓醇的理論塔板數(shù)大于8000，保留時(shí)間為10.3min，與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5。由其標(biāo)準(zhǔn)曲線可得：腦脊液中梓醇在0.5～40μg/ml濃度范圍線性關(guān)系良好。線性回歸方程為y=5214.1x+1499.4（r=0.9997），最低檢出限量為0.3μg/ml。測得低、中、高濃度絕對回收率為（90.22±1.71）％

12、、（89.11±1.17）％、（86.87±0.98）％；方法回收率為（99.98±2.00）％、（100.31±1.69）％、（99.94±1.28）％；日內(nèi)、日間精密度RSD均小于4％。在-20℃下冷凍保存15d，低、中、高濃度組樣品濃度分別為（1.00±0.02）μg/ml、（4.93±0.11）μg/ml、（19.98±0.13）μg/ml，含量無明顯變化（P>0.05），樣品在此凍存條件下15天內(nèi)穩(wěn)定。 2.2,藥代動(dòng)

13、力學(xué)研究 按大鼠5.0mg/kg尾靜脈注射1.0mg/ml梓醇生理鹽水和梓醇凍干粉針生理鹽水后，其動(dòng)力學(xué)行為符合二室模型的特點(diǎn)。梓醇組主要?jiǎng)恿W(xué)參數(shù)如下：分布半衰期（T1/2α）為（27.47±5.10）min、消除半衰期（T1/2β）為（165.13±12.47）min、中央室表觀分布容積（Vc）為（0.1983±0.0159）（mg/kg）/（μg/ml）、清除率（C1）為（0.0014±0.0001）mg/kg/min/（

14、μg/ml）、藥時(shí)曲線下面積（AUC）為（3500.95±240.41）（mg/ml·min；梓醇凍干粉針組的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)如下：分布半衰期（T1/2α）為（30.52±5.81）min、消除半衰期（T1/2p）為（182.25±36.32）min、中央室表觀分布容積（Vc）為（0.1919±0.0162）（mg/kg）/（μg/ml）、清除率（C1）為（0.0015±0.0001）mg/kg/min/（μg/ml）、藥時(shí)曲線下面積

15、（AUC）為（3451.66±210.41）（mg/ml）·min。梓醇和梓醇凍干粉針在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)過程無明顯差異（P>0.05）。 2.3,腦脊液中梓醇含量的考察 按大鼠5.0mg/kg尾靜脈注射1.0mg/ml梓醇生理鹽水和梓醇凍干粉針生理鹽水，40min后，測得在大鼠腦脊液中梓醇的濃度：梓醇組為（5.09±1.03）μg/ml、梓醇凍干粉針組為（5.19±0.93）μg/ml。 結(jié)論： 1.

16、本研究確定了梓醇凍干粉針的處方及成型工藝，為臨床提供了治療腦缺血疾病一種梓醇的新劑型新制劑。 2.本研究建立了反相高效液相色譜法測定水溶液、血清和腦脊液中梓醇的含量測定方法，該方法操作簡便，線性良好，能較準(zhǔn)確地測定水溶液、血清和腦脊液中梓醇的含量。 3.通過梓醇凍干粉針?biāo)幋鷦?dòng)力學(xué)的考察，結(jié)果表明：梓醇凍干粉針中加入的輔料對梓醇在體內(nèi)的消除規(guī)律無影響，說明加入的輔料較合理；通過腦脊液中梓醇含量的測定，其結(jié)果說明加入輔料對促