梓葛凍干粉針的研制及其初步安全性評價.pdf

1、梓葛凍干粉針為本實驗室自主研發(fā)的用于防治缺血性腦血管疾病的一種新型中藥單體復方制劑,具有獨創(chuàng)性,可獲得自主知識產權。本課題受到教育部項目(XDJK2009C084、XDJK2010C059)科研基金的支持。
　　 目的:
　　 按照國家食品藥品監(jiān)督管理局《藥品注冊管理辦法》相關要求,研制梓葛凍干粉針,確定其的處方、制備工藝,制定其質量標準,并考察其穩(wěn)定性及初步安全性。
　　 方法:
　　 1.梓葛凍干粉針

2、的處方篩選:選用磺丁基-β-環(huán)糊精作為葛根素的增溶劑,制作磺丁基-β-環(huán)糊精對葛根素的增溶曲線,應用梯度濃度法確定磺丁基-β-環(huán)糊精和葛根素的投料比;采用分組評分法考察含不同質量濃度的葡萄糖、乳糖、甘露醇和空白的梓葛凍干粉針的外觀性狀和水分含量,從而選擇合適的填充劑,確定梓葛凍干粉針的處方。
　　 2.梓葛凍干粉針的制備工藝研究:采用時間評分法考察不同的投料順序和加熱條件對葛根素溶解速度的影響,確定梓葛凍干粉針的制備過程:采用分

3、組評分法考察不同預凍溫度與時間、升華干燥溫度與時間和解析干燥溫度與時間對梓葛凍干粉針的影響,確定梓葛凍干粉針的凍干工藝。
　　 3.梓葛凍干粉針質量標準研究:采用反向高效液相色譜法(RP-HPLC),建立藥物含量及有關物質的測定方法;考察梓葛凍干粉針產品含量、有關物質、水分、pH值等變化,對其進行質量控制,建立其質量標準。
　　 4.梓葛凍干粉針的穩(wěn)定性考察:對放大實驗生產的三批梓葛凍干粉針進行影響因素實驗、加速實驗和長

4、期實驗,考察其穩(wěn)定性。
　　 5.梓葛凍干粉針的初步安全性考察:安全性考察分為過敏性實驗、溶血性實驗、刺激性實驗、急性毒性實驗和一般藥理學實驗。(1)過敏性實驗:觀察攻擊給藥后豚鼠是否出現過敏反應并判定過敏反應程度為全身主動過敏實驗;觀察攻擊給藥后SD大鼠皮膚是否出現藍斑并記錄藍斑直徑為皮膚被動過敏實驗。(2)溶血性實驗:觀察擬用臨床濃度梓葛凍干粉針是否導致2%兔紅細胞懸液出現溶血和凝聚反應。(3)刺激性實驗:觀察用藥側兔耳血管

5、和肌肉組織的病理切片是否出現病變和壞死,并與對照側比較。(4)急性毒性實驗:觀察和記錄不同濃度梓葛凍干粉針給藥后KM小鼠的反應和死亡情況。(5)比較梓葛凍干粉針給藥后對動物的神經系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)的影響,并與生理鹽水對照組比較。
　　 結果:
　　 1.梓葛凍干粉針的處方:磺丁基-β-環(huán)糊精是葛根素的良好增溶劑,增溶曲線線性關系良好(r=0.9997);磺丁基-β-環(huán)糊精和葛根素的投料質量比確定;梓葛凍干粉針最佳

6、處方為葛根素Xmg、梓醇Ymg和磺丁基-β-環(huán)糊精Zmg,制成2mL凍干原液。
　　 2.梓葛凍干粉針的制各工藝:(1)凍干原液的制備;按最佳處方稱取各組分,確定投料順序,加熱加速葛根素溶解:(2)產品的凍干工藝:①預凍:確定預凍溫度和時間;②升華干燥:確定真空度和時間,自然升溫至室溫;③解析干燥:確定真空度,升溫,保溫時間。
　　 3.梓葛凍干粉針質量標準:(1)含量及有關物質:采用RP-HPLC法,流動相為水-乙腈,

7、梯度洗脫,檢測波長為210nm,葛根素和梓醇均在5～200mg/L濃度范圍內呈現良好的線性關系(r=0.9999);相對含量控制范圍為90%～110%;有關物質控制＜2%;(2)水分控制在＜3%;(3)pH值控制在4.5～6.5。
　　 4.梓葛凍干粉針的穩(wěn)定性:梓葛凍干粉針的穩(wěn)定性實驗結果顯示,影響因素實驗的高溫條件(60℃)對梓葛凍干粉針的影響強于高濕度(90%)和強光條件(4500Lx),加速實驗6個月和長期實驗9個月的結

8、果均顯示梓葛凍干粉針的含量、有關物質、水分、pH值等相對穩(wěn)定。
　　 5.梓葛凍干粉針的初步安全性:(1)過敏性實驗:梓葛凍干粉針28.4mg/kg和85.3mg/kg劑量組豚鼠均未出現全身主動過敏反應:梓葛凍干粉針32.7mg/kg和98.1mg/kg劑量組SD大鼠均未出現明顯皮膚過敏反應。(2)溶血性實驗:1mg/mL擬用臨床濃度的梓葛凍干粉針管均未出現溶血和紅細胞凝聚現象。(3)刺激性實驗:17.0mg/kg和51.0mg

9、/kg梓葛凍干粉針用藥側兔耳血管和肌肉組織均未見明顯病變、壞死現象。(4)急性毒性實驗:梓葛凍干粉針對KM小鼠的LD50為1562.4mg/kg。(5)一般藥理學實驗:梓葛凍干粉針52.3mg/kg、104.6mg/kg、209.2mg/kg劑量對KM小鼠的中樞神經系統(tǒng)未見明顯影響(P＞0.05):梓葛凍干粉針32.7mg/kg、65.4mg/kg、130.8mg/kg劑量對SD大鼠的心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)未見明顯影響(P＞0.05)。<