微環(huán)境在多囊腎病囊腫發(fā)生與發(fā)展中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、研究目的:本課題探討了常染色體顯性遺傳多囊腎病(ADPKD)中囊腫襯里上皮細(xì)胞與巨噬細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞構(gòu)成的微環(huán)境對(duì)腎小管上皮細(xì)胞的影響，探尋其中可能發(fā)揮作用的因子及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法:
　　1.建立小鼠巨噬細(xì)胞（RAW264.7）與人腎囊腫襯里上皮細(xì)胞（Ox161細(xì)胞）共培養(yǎng)模型，以實(shí)時(shí)PCR技術(shù)與免疫印跡技術(shù)檢測不同刺激因素對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響。
　　2.建立MDCKⅡ細(xì)胞、小鼠巨噬細(xì)胞（RAW264.7）與

2、人腎囊腫襯里上皮細(xì)胞（Ox161細(xì)胞）三維共培養(yǎng)模型，比較MDCKⅡ細(xì)胞不同條件下囊泡直徑。以免疫印跡技術(shù)檢測MDCKⅡ細(xì)胞與多囊腎病相關(guān)通路蛋白的表達(dá)。
　　3.以實(shí)時(shí)PCR技術(shù)、免疫印跡技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測小鼠巨噬細(xì)胞（RAW264.7）與人腎囊腫襯里上皮細(xì)胞（Ox161細(xì)胞）不同共培養(yǎng)模式與刺激條件下TNF-α的表達(dá)與分泌。
　　4.以實(shí)時(shí)PCR技術(shù)、免疫印跡技術(shù)檢測MDCKⅡ細(xì)胞與小鼠巨噬細(xì)胞(RAW264.

3、7)、人腎囊腫襯里上皮細(xì)胞（Ox161細(xì)胞）共培養(yǎng)條件下FIP2表達(dá)。
　　5.繁殖并鑒定Pkd1 IKO小鼠，于4周齡予腹腔注射他莫昔芬誘導(dǎo)Pkd1基因敲除，于5周齡建立單側(cè)腎臟缺血再灌注模型。
　　6.收集Pkd1 IKO小鼠IRI急性期腎組織標(biāo)本，免疫印跡法檢測其TNF-α、FIP2蛋白的表達(dá)，實(shí)時(shí)PCR技術(shù)檢測其TNF-α、FIP2表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.三維培養(yǎng)條件下，與對(duì)照組相比，MDCKⅡ細(xì)胞與

4、M2型巨噬細(xì)胞、囊腫襯里上皮細(xì)胞共培養(yǎng)，其囊泡直徑明顯增加。MDCKⅡ細(xì)胞與M2型巨噬細(xì)胞、囊腫襯里上皮細(xì)胞共培養(yǎng)，其pSTAT3、pAkt、pERK、pCREB、PCNA表達(dá)增加。MDCKⅡ細(xì)胞與M1型巨噬細(xì)胞、囊腫襯里上皮細(xì)胞共培養(yǎng)，其FIP2蛋白表達(dá)增加。
　　2.Pkd1 IKO小鼠單側(cè)腎臟IRI后，急性期損傷側(cè)腎臟TNF-α、FIP2表達(dá)增加，Cre+小鼠較Cre-小鼠腎臟損傷更重，F(xiàn)IP2表達(dá)更高。
　　結(jié)論:細(xì)