急性等容性血液稀釋聯(lián)合控制性降壓對(duì)大鼠腦神經(jīng)元形態(tài)學(xué)及腦特異性蛋白的影響.pdf

1、異體血輸注常伴有明顯的不良反應(yīng)，如輸血反應(yīng)、疾病的傳播和免疫抑制等引起醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注。避免或減少圍手術(shù)期異體輸血，實(shí)行血液保護(hù)成為重要的研究課題。急性等容性血液稀釋和控制性降壓是目前臨床上應(yīng)用較多的血液保護(hù)方法，二者的聯(lián)合應(yīng)用可進(jìn)一步提高節(jié)血效能，但急性等容性血液稀釋聯(lián)合控制性降壓后，機(jī)體的正常生理代償機(jī)制削弱，可能會(huì)引發(fā)重要器官缺血缺氧性損傷。腦是機(jī)體組織中氧儲(chǔ)備較低而氧代謝率較高的器官，對(duì)缺血缺氧性損傷較敏感，是圍手術(shù)期重點(diǎn)保護(hù)臟

2、器。 目的:本研究在SD大鼠上復(fù)制急性等容性血液稀釋聯(lián)合控制性降壓模型后，觀察大鼠腦組織形態(tài)學(xué)、神經(jīng)元型一氧化氮合酶(nNOS)表達(dá)和血清S100B濃度的變化，旨在評(píng)價(jià)血液稀釋聯(lián)合控制性降壓后是否會(huì)引發(fā)腦損傷及所引發(fā)損傷的程度和性質(zhì)，并探討損傷發(fā)生的可能機(jī)制，為臨床上安全應(yīng)用此聯(lián)合技術(shù)提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:大鼠行股動(dòng)靜脈穿刺，股動(dòng)脈放血的同時(shí)，經(jīng)股靜脈等速輸入等體積的6％羥乙基淀粉，具體放血量依據(jù)公式確定。血液稀釋

3、后30min用泵入0.15～8μg/kg·min的0.01％硝普鈉溶液，控制MAP50～60 mmHg，持續(xù)1h。實(shí)驗(yàn)過程中持續(xù)監(jiān)測(cè)平均動(dòng)脈壓(MAP)，心率(HR)及中心靜脈壓(CVP)，并于血液稀釋前即刻(T0)，降壓前即刻(T1)，降壓后30min(T2)和停降壓后30min(T3)及假手術(shù)組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)對(duì)心率和中心靜脈壓進(jìn)行分析記錄，并于上述時(shí)間點(diǎn)作動(dòng)脈血?dú)夥治?。SD大鼠隨機(jī)分為5組，分別為假手術(shù)對(duì)照組和四個(gè)實(shí)驗(yàn)組(急性等容性血液

4、稀釋聯(lián)合控制性降壓，Hct值分別為30％、25％、20％和15％)，每組8只。血液稀釋后3小時(shí)處死大鼠，應(yīng)用光鏡及電鏡觀察大鼠腦海馬CA1區(qū)腦細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，并應(yīng)用免疫組化法測(cè)定CA1區(qū)nNOS的表達(dá)，應(yīng)用ELISA法測(cè)定大鼠基礎(chǔ)及處死前血清S100B濃度。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。各組腦海馬CA1區(qū)神經(jīng)元型一氧化氮合酶(nNOS)表達(dá)計(jì)數(shù)，線粒體超微結(jié)構(gòu)評(píng)分及血清S100B濃度的比較采用單因素方差分析和Kruskal-W

5、allis檢驗(yàn)。組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)HR及CVP比較采用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)方差分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 10.0軟件包，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果:(1)各實(shí)驗(yàn)組HR在控制性降壓階段均較基礎(chǔ)值明顯上升(p<0.05)，實(shí)驗(yàn)全程各組動(dòng)物CVP與基礎(chǔ)值比差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)Hotl5％組在停降壓后pH值較基礎(chǔ)值明顯下降(P<0.05)。(3)光鏡下示Hct20％和Hct15％組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元排列紊亂，部分核深染。(4

6、)電鏡下示Hct20％和Hct15％組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元線粒體及胞核超微結(jié)構(gòu)明顯改變，且線粒體評(píng)分明顯高于假手術(shù)組，Hct30％和Hct25％組(P<0.05)。(5)Hct20％和Hct15％組大鼠血清S100B濃度較假手術(shù)組，Hct30％組和Hct25％組比，明顯增高(P<0.05)。(6)Hct25％、Hct20％和Hct15％組大鼠血液稀釋聯(lián)合控制性降壓后腦組織nNOS水平明顯高于假手術(shù)組，Hct30％組(P<0.05)。

7、 結(jié)論:(1)本實(shí)驗(yàn)中四種程度血液稀釋聯(lián)合控制性低血壓于50～60mmHg水平時(shí)，大鼠HR和CVP變化與以往研究一致，表明本模型是穩(wěn)定可靠的。(2)Hct15％H時(shí)聯(lián)合控制性降壓后動(dòng)脈血pH較基礎(chǔ)值明顯下降，提示此時(shí)存在組織灌注不足。(3)Hct20％和Hct15％聯(lián)合控制性降壓后腦細(xì)胞核皺縮及線粒體腫脹明顯，提示有明顯的缺血缺氧性損傷的發(fā)生。(4)Hct20％和Hct15％聯(lián)合控制性降壓后，血清S100B濃度明顯上升，同樣提示了