急性等容性血液稀釋聯(lián)合控制性降壓對大鼠腦神經(jīng)元形態(tài)學及腦特異性蛋白的影響.pdf

1、異體血輸注常伴有明顯的不良反應，如輸血反應、疾病的傳播和免疫抑制等引起醫(yī)學界的廣泛關注。避免或減少圍手術期異體輸血，實行血液保護成為重要的研究課題。急性等容性血液稀釋和控制性降壓是目前臨床上應用較多的血液保護方法，二者的聯(lián)合應用可進一步提高節(jié)血效能，但急性等容性血液稀釋聯(lián)合控制性降壓后，機體的正常生理代償機制削弱，可能會引發(fā)重要器官缺血缺氧性損傷。腦是機體組織中氧儲備較低而氧代謝率較高的器官，對缺血缺氧性損傷較敏感，是圍手術期重點保護臟

2、器。 目的:本研究在SD大鼠上復制急性等容性血液稀釋聯(lián)合控制性降壓模型后，觀察大鼠腦組織形態(tài)學、神經(jīng)元型一氧化氮合酶(nNOS)表達和血清S100B濃度的變化，旨在評價血液稀釋聯(lián)合控制性降壓后是否會引發(fā)腦損傷及所引發(fā)損傷的程度和性質，并探討損傷發(fā)生的可能機制，為臨床上安全應用此聯(lián)合技術提供一定的實驗依據(jù)。 方法:大鼠行股動靜脈穿刺，股動脈放血的同時，經(jīng)股靜脈等速輸入等體積的6％羥乙基淀粉，具體放血量依據(jù)公式確定。血液稀釋

3、后30min用泵入0.15～8μg/kg·min的0.01％硝普鈉溶液，控制MAP50～60 mmHg，持續(xù)1h。實驗過程中持續(xù)監(jiān)測平均動脈壓(MAP)，心率(HR)及中心靜脈壓(CVP)，并于血液稀釋前即刻(T0)，降壓前即刻(T1)，降壓后30min(T2)和停降壓后30min(T3)及假手術組對應時間點對心率和中心靜脈壓進行分析記錄，并于上述時間點作動脈血氣分析。SD大鼠隨機分為5組，分別為假手術對照組和四個實驗組(急性等容性血液

4、稀釋聯(lián)合控制性降壓，Hct值分別為30％、25％、20％和15％)，每組8只。血液稀釋后3小時處死大鼠，應用光鏡及電鏡觀察大鼠腦海馬CA1區(qū)腦細胞形態(tài)結構變化，并應用免疫組化法測定CA1區(qū)nNOS的表達，應用ELISA法測定大鼠基礎及處死前血清S100B濃度。計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示。各組腦海馬CA1區(qū)神經(jīng)元型一氧化氮合酶(nNOS)表達計數(shù)，線粒體超微結構評分及血清S100B濃度的比較采用單因素方差分析和Kruskal-W

5、allis檢驗。組內不同時間點HR及CVP比較采用重復測量設計方差分析。統(tǒng)計學分析采用SPSS 10.0軟件包，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結果:(1)各實驗組HR在控制性降壓階段均較基礎值明顯上升(p<0.05)，實驗全程各組動物CVP與基礎值比差別無統(tǒng)計學意義。(2)Hotl5％組在停降壓后pH值較基礎值明顯下降(P<0.05)。(3)光鏡下示Hct20％和Hct15％組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元排列紊亂，部分核深染。(4

6、)電鏡下示Hct20％和Hct15％組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元線粒體及胞核超微結構明顯改變，且線粒體評分明顯高于假手術組，Hct30％和Hct25％組(P<0.05)。(5)Hct20％和Hct15％組大鼠血清S100B濃度較假手術組，Hct30％組和Hct25％組比，明顯增高(P<0.05)。(6)Hct25％、Hct20％和Hct15％組大鼠血液稀釋聯(lián)合控制性降壓后腦組織nNOS水平明顯高于假手術組，Hct30％組(P<0.05)。

7、 結論:(1)本實驗中四種程度血液稀釋聯(lián)合控制性低血壓于50～60mmHg水平時，大鼠HR和CVP變化與以往研究一致，表明本模型是穩(wěn)定可靠的。(2)Hct15％H時聯(lián)合控制性降壓后動脈血pH較基礎值明顯下降，提示此時存在組織灌注不足。(3)Hct20％和Hct15％聯(lián)合控制性降壓后腦細胞核皺縮及線粒體腫脹明顯，提示有明顯的缺血缺氧性損傷的發(fā)生。(4)Hct20％和Hct15％聯(lián)合控制性降壓后，血清S100B濃度明顯上升，同樣提示了