用于誘導(dǎo)多潛能性干細(xì)胞的人羊水細(xì)胞培養(yǎng)及逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝平臺(tái)的建立.pdf

1、基因治療作為一種全新的疾病治療方法,有著廣泛的應(yīng)用前景。隨著分子病理學(xué)和分子生物學(xué)等相關(guān)學(xué)科的發(fā)展,基因治療所針對(duì)的疾病也從早期的單基因遺傳病擴(kuò)展到腫瘤、病毒性疾病和心血管病等嚴(yán)重威脅人類健康的疾病。在目前廣泛采用的體外基因治療策略中,靶細(xì)胞的選擇是一個(gè)關(guān)鍵因素。干細(xì)胞由于具有自我更新與多向分化潛能的特性,因此是一種理想的基因治療靶細(xì)胞。2006年出現(xiàn)的將幾種轉(zhuǎn)錄因子導(dǎo)入成體細(xì)胞將其誘導(dǎo)成為具有干細(xì)胞特性的多潛能性干細(xì)胞(iPSC)的新

2、技術(shù),更是使利用患者來(lái)源的成體細(xì)胞誘導(dǎo)成為干細(xì)胞后進(jìn)行自體化基因治療成為可能。因此,本室利用產(chǎn)前診斷過(guò)程中的遺傳病患兒羊水細(xì)胞,通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄病毒將其誘導(dǎo)成為iPS細(xì)胞,建立不同疾病特異性的iPS細(xì)胞系,進(jìn)而利用我室的核糖體基因區(qū)打靶載體進(jìn)行基因治療研究。本研究作為這一研究方向的前期準(zhǔn)備,著重建立羊水細(xì)胞的培養(yǎng)和篩選技術(shù)平臺(tái),同時(shí)建立用于誘導(dǎo)的逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝體系,為后續(xù)的誘導(dǎo)多潛能性干細(xì)胞奠定基礎(chǔ)。
　　 本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在獲

3、取人羊水細(xì)胞后,用機(jī)械法去除成纖維樣細(xì)胞和上皮樣細(xì)胞的方法,能較好的純化出羊水中的短梭形細(xì)胞。利用攜帶Slc7a1受體基因的慢病毒感染純化后的短梭形細(xì)胞,使其表達(dá)Slc7a1受體,從而獲得了可用于病毒感染誘導(dǎo)的羊水細(xì)胞。同時(shí),為獲得誘導(dǎo)所需的逆轉(zhuǎn)錄病毒,本研究成功利用Plat-E包裝細(xì)胞包裝出了可用于細(xì)胞感染的逆轉(zhuǎn)錄病毒。為檢測(cè)病毒感染能力,用包裝好的pMX-GFP對(duì)照逆轉(zhuǎn)錄病毒感染攜帶Slc7a1受體的人羊水細(xì)胞,48h后在倒置顯微鏡