膠霉毒素對煙曲霉侵染細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)磷脂酶D和肌動(dòng)蛋白骨架變化的影響.pdf

1、目的：探討膠霉毒素對煙曲霉侵入宿主細(xì)胞的侵染率及細(xì)胞磷脂酶D(PLD)活性和肌動(dòng)蛋白骨架變化的影響。
　　 方法：以煙曲霉野生株(B—5233)、膠霉毒素敲除株(gliPΔ)及其回補(bǔ)株(gliPR)分別侵染A549細(xì)胞和J774細(xì)胞為模型，利用Triton破膜法測定三種不同煙曲霉對細(xì)胞侵染率的差異，采用終濃度分別1、10、20、50、100、200、500、800ng/ml的膠霉毒素處理野生株孢子，測定侵染率的變化；采用脂化學(xué)法

2、和蛋白免疫印記法分別測定膠霉毒素對A549細(xì)胞和J774細(xì)胞內(nèi)磷脂酶D活性及表達(dá)量變化；運(yùn)用激光共聚焦顯微鏡觀察膠霉毒素對A549和J774細(xì)胞肌動(dòng)蛋白骨架的影響；并用煙曲霉野生株孢子或膠霉毒素分別與A549細(xì)胞和J774細(xì)胞共同孵育，采用MTT法測定細(xì)胞活性的變化。
　　 結(jié)果：膠霉毒素敲除株對A549細(xì)胞的侵染率明顯低于野生株(P<0．05)，而回補(bǔ)株的侵染率與野生株相比則無明顯差別(P>0．05)；缺陷株對J774細(xì)胞的侵

3、染率與野生株相比明顯升高(P<0．05)，而對回補(bǔ)株的侵染率與野生株相比則無明顯差別(P>0．05)；膠霉毒素處理的孢子對A549細(xì)胞的侵染率，濃度為100ng/ml時(shí)，與對照組相比顯著升高(P<0．01)，濃度為200ng/ml時(shí)，侵染率達(dá)最高，之后隨著濃度的增加而下降；膠霉毒素處理的孢子對J774細(xì)胞的侵染率，濃度達(dá)到20ng/ml時(shí)，與對照組相比明顯降低(P<0．05)，隨著濃度的升高而逐步下降；膠霉毒素(100ng/ml)處理A

4、549和J774細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)磷脂酶D的活性明顯增高(P<0．05)，其表達(dá)量也增加；膠霉毒素能夠使A549細(xì)胞的肌動(dòng)蛋白骨架發(fā)生改變，細(xì)胞皺縮、清晰的肌動(dòng)蛋白絲消失、邊緣出現(xiàn)大量雜亂的細(xì)絲，而對J774細(xì)胞無明顯影響；膠霉毒素(100ng/ml)能降低J774細(xì)胞的活性(P<0．05)，而對A549細(xì)胞活性則無明顯影響(P>0．05)。
　　 結(jié)論：膠霉毒素對煙曲霉侵入A549細(xì)胞和J774細(xì)胞侵染效率的作用不盡相同；膠霉毒素