哮喘小鼠肺T細(xì)胞中LAT的表達(dá)及其功能的研究.pdf

1、背景：哮喘是由多種細(xì)胞和細(xì)胞成分參與的氣道慢性炎癥性疾病，也是一種具有多基因遺傳傾向的疾病。在哮喘的發(fā)病過程中，T細(xì)胞對致敏原的識別以及T細(xì)胞的活化是關(guān)鍵性始動環(huán)節(jié)。研究證實，哮喘患者體內(nèi)存在Thl／Th2亞群的功能失衡：Th1型細(xì)胞免疫應(yīng)答反應(yīng)較正常人低，而Th2型的免疫應(yīng)答水平則顯著上調(diào)。LAT基因在介導(dǎo)T細(xì)胞成熟分化的跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起了重要的作用。 目的：明確LAT基因在哮喘小鼠肺組織T細(xì)胞中的表達(dá)是否存在異常；構(gòu)建能用于

2、LAT基因功能研究的真核表達(dá)載體；觀察氣道內(nèi)LAT基因轉(zhuǎn)染對哮喘小鼠氣道炎癥的影響。 方法：免疫磁珠負(fù)選法分離純化小鼠肺臟T細(xì)胞,純度經(jīng)流式細(xì)胞儀驗證。采用半定量PCR及Western Blot方法檢測哮喘小鼠與正常小鼠肺組織T細(xì)胞中LAT的表達(dá)是否存在差異；利用基因克隆技術(shù)構(gòu)建真核表達(dá)載體Pcmv-HA-LAT，轉(zhuǎn)染小鼠淋巴細(xì)胞，運用Western Blot方法檢測外源LAT蛋白的表達(dá)；經(jīng)鼻滴入Pcmv-HA-LAT質(zhì)粒與脂質(zhì)

3、體的混合物后觀察小鼠BALF中細(xì)胞成分、BALF及血清中IL-4及IFN-γ，肺組織病理改變。 結(jié)果：提取的小鼠肺組織T細(xì)胞純度>95％；哮喘小鼠肺組織T細(xì)胞的LAT基因在Mrna轉(zhuǎn)錄水平及蛋白水平的表達(dá)均顯著低于正常小鼠（P<0.05）。構(gòu)建的真核表達(dá)載體Pcmv-HA-LAT成功轉(zhuǎn)染小鼠淋巴細(xì)胞，并運用Western Blot方法檢測到外源LAT蛋白的表達(dá)；轉(zhuǎn)入了LAT基因后，哮喘小鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)、嗜酸粒細(xì)胞百分比、