穿心蓮內(nèi)酯對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖、凋亡及Na+-K+-ATP酶活性的影響.pdf

1、目的：
　　觀察穿心蓮內(nèi)酯（Andrographolide, AD）對(duì)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞系體外增殖、凋亡及Na+-K+-ATP酶活性的影響，初步探討其可能的抗腫瘤作用機(jī)制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)CNE-2低分化鼻咽癌細(xì)胞，并根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆譃?組：
　　（1）空白對(duì)照組（僅給予0.1％DMSO）；
　?。?）AD低劑量組（1μmol/L AD）；
　?。?）中劑量組（3μmol/L AD）；

2、
　?。?）高劑量組（5μmol/L AD）。
　　根據(jù)不同的研究目的孵育24~72h，WST-8法檢測CNE-2細(xì)胞的增殖情況；流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期的改變以及凋亡；Western blot檢測不同濃度AD處理后CNE-2細(xì)胞內(nèi)caspase-3以及Bcl-2的表達(dá)；無機(jī)磷法檢測CNE-2細(xì)胞Na+-K+-ATP酶活性改變的情況。
　　結(jié)果：
　　1. WST-8結(jié)果顯示：AD對(duì)CNE-2細(xì)胞的體外生長呈時(shí)間-

3、劑量依賴性。AD在同一時(shí)間點(diǎn)對(duì)CNE-2的抑制率隨劑量增加而遞增。而同一藥物濃度隨作用時(shí)間的延長其抑制率也明顯增強(qiáng)。
　　2.流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示：CNE-2 G0/G1期細(xì)胞比例隨AD濃度增加而升高（P<0.05），而S期細(xì)胞和G2/M期比例有所下降；隨著AD作用濃度的增加，細(xì)胞凋亡率明顯增加，且呈一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系。其中5μmol/L AD作用后，細(xì)胞凋亡率達(dá)到41.6%，與對(duì)照組相比，差異有顯著性意義（P<0.05）。<

4、br>　　3. Western blot結(jié)果顯示：CNE-2細(xì)胞經(jīng)不同濃度 AD處理24h后，細(xì)胞內(nèi)caspase-3的活性亞基（17-kDa）較正常對(duì)照組明顯增多；細(xì)胞內(nèi)Bcl–2蛋白表達(dá)水平隨AD作用濃度的增加而降低。
　　4.不同濃度的AD能不同程度抑制CNE-2細(xì)胞Na+-K+-ATP酶的活性。其中AD濃度為1.0μmol/L時(shí)，能使Na+-K+-ATP酶活性降低至83%，而5.0μmol/L AD能使Na+-K+-ATP