2，3，7，8-TCDD對乳腺癌細胞周期及特異性基因表達調(diào)控的影響.pdf

1、目的:通過檢測2,3,7,8-四氯二苯并-對-二噁英(tetrachlorodibenzo-p-dioxinTCDD)在體外對乳腺癌MCF-7細胞活力、端粒酶活性、細胞周期及細胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表達水平和細胞內(nèi)游離鈣離子濃度的影響，為進一步探討其毒作用及其機制提供參考依據(jù)。 方法:常規(guī)培養(yǎng)乳腺癌MCF-7細胞。(1)在培養(yǎng)液中分別加入濃度為0，0.03，0.0625，0.125，0.25，0.5，1.0μmol

2、·L-1的2,3,7,8-TCDD作用于MCF-7細胞24h，用噻唑藍(MIT)法測定MCF-7的細胞活力。(2)用0.5μmol·L-1的2,3,7,8-TCDD作用于MCF-7細胞24,48,72h，裂解MCF-7細胞，采用BCA方法定量蛋白，端粒酶重復序列擴增-銀染法檢測端粒酶活性。(3)以0.05μmol·L-1的2,3,7,8-TCDD作用MCF-7細胞24,48,72h，流式細胞術(shù)(FCM)檢測MCF-7細胞周期；SP免疫組

3、化法檢測MCF-7細胞周期蛋白Cyclin D1的表達。(4)負載鈣離子熒光劑Fluo-3/AM，在激光共聚焦顯微鏡下觀察細胞內(nèi)鈣離子的濃度變化。 結(jié)論:(1)2,3,7,8-TCDD對MCF-7細胞毒性作用存在濃度依賴性，隨濃度增大，細胞存活率明顯降低；同一濃度下隨著作用時間延長對細胞抑制率降低。(2)正常培養(yǎng)的乳腺癌MCF-7細胞的端粒酶活性呈陽性表達，經(jīng)2,3,7,8-TCDD作用后，端粒酶活性增強，但隨作用時間延長而降低