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文檔簡介
1、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)以多關(guān)節(jié)損傷和各種關(guān)節(jié)外炎癥表現(xiàn)為主要特征,是一種常見的具有較高致殘性的系統(tǒng)性自身免疫性疾病,其確切病因和發(fā)病機(jī)制至今尚不完全清楚,但一般認(rèn)為它是多種遺傳因素和環(huán)境因素共同作用所導(dǎo)致的自身免疫性疾病。RA在自身免疫性結(jié)締組織病中其患病率居首位,全世界的患病率大約為1%。
研究表明人類白細(xì)胞抗原(human leukocyte antigen,HIA)-DRB1基
2、因的多態(tài)性與RA的易感性有密切的關(guān)系,尤其攜帶共同表位(shared epitope,SE)基因復(fù)合子的人有高度危險性。近來發(fā)現(xiàn)環(huán)胍氨酸肽(Cyclic-citrullinated peptide,CCP)抗體對RA診斷有較高的敏感性和非常高的特異性。CCP抗體在RA的早期,甚至在RA發(fā)病前幾年就可被檢測到,提示CCP抗體在RA的發(fā)病機(jī)制中有重要作用。肽精氨酸轉(zhuǎn)亞胺基酶(Peptidylarginine deiminases,PADIs
3、)是一族翻譯后的修飾酶,能催化蛋白質(zhì)中的精氨酸殘基轉(zhuǎn)變?yōu)殡野彼釟埢=陙淼难芯堪l(fā)現(xiàn)PADI4與RA的易感性有關(guān),并且在日本人群中發(fā)現(xiàn),PADI4基因多態(tài)性與RA發(fā)病的易感性有很強(qiáng)的相關(guān)性。
本實(shí)驗主要研究:(1)通過特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSP)技術(shù)對HLA-DRB1基因的SE表型進(jìn)行分析;(2)采用ELISA法檢測CCP抗體,研究CCP抗體在RA中的診斷價值,并分析CCP抗體與SE表型和RF的關(guān)系;(3)應(yīng)用
4、實(shí)時熒光定量RT-PCR技術(shù),研究PADI4基因在RA患者的表達(dá)水平,并探討SE表型與PADI4基因表達(dá)水平的相關(guān)性;(4)通過對PADI4基因擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序,研究PADI4基因的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)與SE表型和RA的關(guān)系。
結(jié)果顯示:(1)RA患者SE表型的陽性率(86.59%)明顯高于對照者(54.36%),并且RA患者SE純合子的陽性率(49.3
5、0%)明顯高于對照者(33.33%)。(2)CCP抗體的敏感性(82.93%)與RF(76.83%)無明顯差別,而特異性(97.99%)顯著高于RF(86.58%)。若CCP抗體同RF聯(lián)合檢測,則能提高RA診斷的敏感性,并且RA患者CCP抗體的出現(xiàn)與SE表型和RF沒有關(guān)系。(3)PADI4基因在RA患者體內(nèi)的表達(dá)明顯高于正常人,其中表現(xiàn)型為SE陽性者表達(dá)顯著高于SE陰性者。(4)PADI4的4個SNPs基因(padi489、padi4_
6、90、padi4_92、padi4_104)的等位基因頻率存在明顯差異,并且當(dāng)SE表型和PADI4的少見等位基因同時出現(xiàn)時的基因型與其他基因型存在明顯差異。
以上結(jié)果提示:SE表型與RA發(fā)病有關(guān),并且當(dāng)SE表型為純合子時,RA的易感性增加。CCP抗體是一個特異性、敏感性均佳的RA實(shí)驗室診斷指標(biāo),具有廣泛的臨床應(yīng)用前景,是一個有實(shí)際應(yīng)用價值的實(shí)驗診斷指標(biāo),但SE表型與CCP抗體無關(guān)。此外,我們發(fā)現(xiàn)PADI4基因有可能是RA的
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