霍亂弧菌檢測(cè)芯片的研制.pdf

1、霍亂弧菌是霍亂的病原菌.霍亂可以引起爆發(fā)、流行、大流行,嚴(yán)重危害人民健康,甚至社會(huì)安定.霍亂在南亞地區(qū)流行了至少上千年.自1817年以來(lái),霍亂發(fā)生過(guò)七次世界大流行.歷史上霍亂的七次大流行的病原菌,前6次是古典型霍亂弧菌,第七次是埃爾托型霍亂弧菌.1992年10月,一種被稱(chēng)為O 139型的新型霍亂弧菌首次襲擊印度大陸,引發(fā)了典型的霍亂爆發(fā).一些專(zhuān)家指出,O 139型霍亂弧菌很可能會(huì)引起第八次世界性霍亂大流行.霍亂弧菌快速準(zhǔn)確的檢測(cè),對(duì)于自

2、然流行的監(jiān)測(cè)與預(yù)防,具有重要意義.20世紀(jì)90年代新出現(xiàn)和發(fā)展起來(lái)的基因芯片技術(shù),是近年來(lái)在生命科學(xué)領(lǐng)域內(nèi)興起的一項(xiàng)高新技術(shù).而用基因芯片檢測(cè)霍亂弧菌的方法,迄今為止,世界范圍內(nèi)均未見(jiàn)公開(kāi)報(bào)道.為了成功地研制一塊應(yīng)用型的霍亂弧菌基因檢測(cè)芯片,以λ噬菌體全基因組DNA模擬病原體霍亂弧菌的一個(gè)靶區(qū)域,試驗(yàn)性地對(duì)霍亂弧菌檢測(cè)芯片探針的制備方法、樣品的標(biāo)記方法和芯片的雜交條件等進(jìn)行了探索和優(yōu)化.通過(guò)多種方法的試驗(yàn)和篩選,找到了一個(gè)簡(jiǎn)便有效的電泳

3、條帶的大規(guī)模批量回收轉(zhuǎn)移方法,即牙簽插膠法;在芯片探針制備的探索中,摸索出了一個(gè)簡(jiǎn)化的大規(guī)模地制備探針的方法,即GIN-PCR法.通過(guò)以λ噬菌體為試驗(yàn)對(duì)象,探索出了一個(gè)實(shí)用、有效的芯片制備技術(shù)和一個(gè)改進(jìn)的芯片檢測(cè)方法.利用這些方法,成功地研制了一塊霍亂弧菌檢測(cè)芯片.經(jīng)過(guò)試驗(yàn)性樣品雜交檢測(cè),結(jié)果證實(shí),研制的霍亂弧菌Tarp檢測(cè)芯片可成功地用于霍亂弧菌樣品的檢測(cè),并確定被檢測(cè)樣品的帶毒情況.在這個(gè)課題的研究實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,還創(chuàng)新了具有推廣價(jià)值的