糖皮質(zhì)激素性高眼壓兔房水的代謝組學研究.pdf

1、目的:
　　 應用代謝組學方法分析糖皮質(zhì)激素性高眼壓模型兔的房水代謝物的變化,并評估口服甘草甜素對高眼壓的拮抗作用。
　　 方法：
　　 1.兔房水中可的松、皮質(zhì)醇及皮質(zhì)酮的定量分析:12只雄性健康新西蘭白兔,分為3組:對照組,玻璃體腔內(nèi)注射0.1 ml必施眼內(nèi)灌注液；曲安奈德高眼壓模型組(TA組),玻璃體腔內(nèi)注射0.1 ml/4 mgTA；地塞米松高眼壓模型組(DEX組),隔日(共15次)球結膜下注射0.1 m

2、l/0.5 mg DEX。在注射前(所有組)、注射后第24天(對照組和TA組)和29天(DEX組)抽取房水,應用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術檢測兔房水中可的松、皮質(zhì)醇以及皮質(zhì)酮含量。在注射前、注射后1天、1周、2周、3周和4周檢測眼壓。
　　 2.糖皮質(zhì)激素性高眼壓模型兔的房水代謝物變化的檢測:動物分組同前。抽取房水時間為注射前(所有組)、注射后第1和24天(對照組和TA組),第29天(對照組和DEX組)。應用核磁共振氫譜檢測和

3、主成分分析技術進行房水代謝物分析。在注射前、注射后1天、1周、2周、3周和4周觀測眼壓。在注射前、注射后1周、2周和29天檢測并記錄閃光視網(wǎng)膜電流圖(FERG)的暗適應反應(視桿細胞反應、最大反應和振蕩電位)、明適應反應(視錐細胞反應和30Hz閃爍反應)和閃光視覺誘發(fā)電位(FVEP)的振幅和潛伏期。
　　 3.口服甘草甜素對兔糖皮質(zhì)激素性高眼壓的拮抗作用:12只雄性健康新西蘭白兔,分為3組:對照組和TA組(造模方法同前)；TA+

4、口服甘草甜素拮抗組(TA+GL組)。在注射前、注射后1和24天抽取3組房水,進行核磁共振氫譜檢測和主成分分析。在注射前、注射后1天、1周、2周、3周和4周測量眼壓；在注射前、注射后1周、2周和24天,測量FERG的暗適應反應和明適應反應,以及FEVP的振幅和潛伏期。
　　 結果：
　　 1.兔房水中可的松、皮質(zhì)醇及皮質(zhì)酮的定量分析:注射后第1天起,TA組眼壓較對照組明顯上升(36.6+4.1 mmHg,P＜0.01)；首

5、次注射后2周起,DEX組眼壓較對照組明顯上升(20.7±3.6 mmHg,P＜0.01)；均持續(xù)到隨訪結束,造模成功。在采用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術所建立的標準曲線中,可的松、皮質(zhì)醇在0.16～100 ng/mL的濃度范圍內(nèi)線性良好(r＞0.998),檢測靈敏度(最低檢測下限)均為0.16 ng/mL,皮質(zhì)酮為10 ng/mL。在房水檢測中,有3個樣品出現(xiàn)痕量,所有樣品的含量均低于最低檢測下限。
　　 2.糖皮質(zhì)激素性高眼壓

6、模型兔的房水代謝物變化的檢測:注射后第1天起,TA組眼壓較對照組明顯上升(37.4±3.5 mmHg,P＜0.01)；首次注射后2周起,DEX組眼壓較對照組明顯上升(21.9±3.0 mmHg,P＜0.01)；造模成功。注射后第1天,TA組房水中三大營養(yǎng)物質(zhì)代謝(糖類、脂類和蛋白質(zhì))、急性期反應蛋白和抗氧化劑的濃度較對照組發(fā)生了明顯變化；在注射后第24天,只有糖類、膽堿(脂類)和抗氧化劑的濃度產(chǎn)生變化；在首次注射后第29天,DEX組除丙

7、氨酸和乳酸的變化不同外,其余代謝物的變化趨勢與TA注射后第1天相同。比較TA(第24天)與DEX組的頻譜,糖類、急性期反應蛋白和抗氧化劑的濃度變化有差異。注射后,TA組FERG的各項指標的振幅較其它組明顯下降、潛伏期明顯延長(P＜0.01)；在注射后第29天,FEVP的振幅較其它組明顯下降、潛伏期明顯延長(P＜0.01)。
　　 3.口服甘草甜素對兔糖皮質(zhì)激素性高眼壓的拮抗作用:注射后第1天起,TA組眼壓較對照組明顯上升(37.

8、3±3.7 mmHg,P＜0.01)；在隨訪中,TA+GL組的眼壓值雖較TA組有所下降,但差異未達到統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。比較兩組的代謝頻譜,可以發(fā)現(xiàn)脂類、抗氧化劑和糖類的濃度出現(xiàn)差異。注射后,TA+GL組FERG各項指標的振幅較TA組上升、潛伏期縮短(P＜0.05)；在注射后24天,TA+GL組FVEP的振幅較TA組上升、潛伏期縮短(P＜0.05)。
　　 結論：
　　 1.采用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術可建立

9、同時測定兔房水中可的松、皮質(zhì)醇和皮質(zhì)酮含量的方法,其靈敏度高,線性關系好。
　　 2.通過核磁共振氫譜檢測和主成分分析,發(fā)現(xiàn)不同的糖皮質(zhì)激素(曲安奈德和地塞米松)誘導的兔高眼壓模型之間和同一激素誘導的不同時程之間(曲安奈德注射后第1天和24天)都存在房水代謝物濃度的差異(涉及脂類、蛋白質(zhì)、急性期蛋白、抗氧化劑和糖類)。提示曲安奈德和地塞米松的眼內(nèi)代謝途徑的差異主要是糖類代謝。
　　 3.曲安奈德誘導的高眼壓模型兔口服甘草