長豐鯽c型和g型溶菌酶基因的克隆及其在細(xì)菌感染條件下的表達(dá)分析.pdf

1、長豐鯽（ChangFeng Carassius auratus gibelio）（品種登記號:GS-04-01-2015）肉質(zhì)嫩、生長快、遺傳穩(wěn)定，市場應(yīng)用前景非常廣闊。但近年來，隨著我國水產(chǎn)養(yǎng)殖規(guī)模的日益擴(kuò)大，鯽（Carassius auratus）大規(guī)模養(yǎng)殖過程中細(xì)菌性病害越來越嚴(yán)重。溶菌酶（Lysozyme，lys）具有廣譜的殺菌功能，在魚類非特異免疫中占有重要地位。本文以長豐鯽和普通鯽為研究對象，克隆長豐鯽c-lys和g-lys

2、 cDNA基因全長;檢測c-lys和g-lys基因在長豐鯽和普通鯽中的組織表達(dá)情況;兩種魚分別感染遲鈍愛德華氏菌、嗜水氣單胞菌和金黃色葡萄球菌后，分析兩種基因在長豐鯽和普通鯽肝臟、腎臟、脾臟和鰓中的表達(dá)變化特征，同時檢測四種組織的形態(tài)學(xué)變化，初步評價它們的免疫防御功能，為探討長豐鯽抗細(xì)菌性疾病能力提供一定的理論依據(jù)。本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.長豐鯽c-lys和g-lys基因克隆
　　長豐鯽c-lys全長698 bp，開

3、放閱讀框（ORF）438 bp，編碼145個氨基酸。含有Glu53和Asp69兩個保守的氨基酸催化位點(diǎn)，八個保守的Cys，可形成四對二硫鍵。N端具有信號肽，是一種分泌蛋白;長豐鯽g-lys全長861 bp，開放閱讀框（ORF）558 bp，編碼185個氨基酸。含有Glu（第73位）、Pro（第86位）和Asp（第97位）三個保守的催化位點(diǎn)。存在一個Cys殘基，但不形成二硫鍵，不存在N端信號肽，是一種胞內(nèi)蛋白。氨基酸序列比對和進(jìn)化樹分析結(jié)

4、果表明:長豐鯽c-lys和g-lys基因在鯉形目魚類進(jìn)化過程中均較為保守。
　　2.三種細(xì)菌刺激后，長豐鯽和普通鯽溶菌酶基因組織表達(dá)變化
　　c-lys和g-lys基因在長豐鯽和普通鯽所檢測組織中均有表達(dá)，且均在腎臟中表達(dá)量最高。感染細(xì)菌后，肝臟、腎臟、脾臟和鰓組織中，長豐鯽和普通鯽c-lys和g-lys基因表達(dá)量均呈現(xiàn)不同程度的上調(diào)，但兩種基因在兩種魚同一組織中升幅、出現(xiàn)高峰的時間等均有差異。
　　3.三種細(xì)菌感染后

5、，長豐鯽和普通鯽各組織的病理變化
　　長豐鯽和普通鯽發(fā)病后鱗片脫落，體表、肛門和鰭等部位伴有不同程度充血和出血現(xiàn)象，但兩種魚在體色和不同細(xì)菌感染剖檢后各組織顏色變化存在一定差異。
　　三種細(xì)菌刺激后，長豐鯽和普通鯽出現(xiàn)癥狀相似:肝臟表現(xiàn)為肝細(xì)胞排列紊亂，分布不均，細(xì)胞核大小不一致，固縮，碎裂壞死，細(xì)胞腫脹，肝血竇和中央靜脈淤血，肝細(xì)胞滴狀玻璃樣變等癥狀;腎臟呈現(xiàn)出腎小球腫大，腎小管上皮細(xì)胞脫落，顆粒樣變，單核巨噬細(xì)胞增多，腎