新生鼠缺氧缺血性腦損傷后神經(jīng)可塑性及其相關(guān)抑制因素的變化.pdf

1、【目的】 1.建立新生兒HIBD實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型； 2.觀察發(fā)育期腦損傷后神經(jīng)可塑性的改變； 3.探討神經(jīng)可塑性改變與學(xué)習(xí)記憶能力的關(guān)系： 4.觀察神經(jīng)可塑性相關(guān)抑制因素ncurocan在發(fā)育期腦損傷后的變化； 5.探討ncurocan對神經(jīng)可塑性的影響。 【方法】 1.7d齡SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組和HIBD組，采用改良Rice法建立新生兒HIBD動(dòng)物模型，通過行為學(xué)和一般狀態(tài)評分進(jìn)

2、行篩選，同時(shí)分別取腦組織進(jìn)行HE染色和透射電鏡觀察其組織病理學(xué)及神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)變化。 2.假手術(shù)組和HIBD組又隨機(jī)分為術(shù)后1d、4d、7d、14d、28d組，通過免疫組化染色及RT-PCR法檢測新生鼠HIBD后突觸素蛋白及mRNA水平的動(dòng)態(tài)變化以反映神經(jīng)可塑性的變化。 3.通過Y臂迷宮實(shí)驗(yàn)檢測新生鼠HIBD后學(xué)習(xí)分辨及記憶能力的變化。 4.通過免疫組化染色及RT-PCR法檢測新生鼠HIBD 1d、4d、7d、14

3、d、28d后neurocan在蛋白及mRNA水平的動(dòng)態(tài)變化。 【結(jié)果】 1.HE染色發(fā)現(xiàn)HIBD組術(shù)后4d病變較為嚴(yán)重，可見結(jié)扎側(cè)大腦組織出現(xiàn)大片壞死，細(xì)胞溶解、消失，術(shù)后7d病灶周圍開始出現(xiàn)膠質(zhì)增生，術(shù)后14d、28d神經(jīng)元大量丟失，最后由膠質(zhì)瘢痕取代。 2.透射電鏡觀察見HIBD組神經(jīng)元呈部分核膜消失，線粒體腫脹，神經(jīng)元突起可見灶性壞死，突觸及突觸囊泡數(shù)量減少、結(jié)構(gòu)破壞。 3.假手術(shù)組突觸素表達(dá)水平隨

4、日齡增加逐漸增高(P<0.05)。而HIBD組術(shù)后4d突觸素免疫活性增高，于術(shù)后7d時(shí)達(dá)到高峰，兩組均高于相應(yīng)假手術(shù)組(P<0.05)；此后HIBD組突觸素免疫活性開始下降，至術(shù)后14d、28d已經(jīng)明顯低于相應(yīng)假手術(shù)組(P<0.05)。RT-PCR發(fā)現(xiàn)突觸素mRNA表達(dá)有相同的結(jié)果(P<0.05)。 4.HIBD術(shù)后14d、28d組大鼠在Y臂迷宮實(shí)驗(yàn)中學(xué)習(xí)分辨和記憶能力均差于假手術(shù)14d、28d組(P<0.05)。 5.假手術(shù)組

5、neurocan的表達(dá)于術(shù)后7d達(dá)到高峰(P<0.05)，此后陽性表達(dá)逐漸減少；HIBD術(shù)后4d、7d組neurocan蛋白及其mRNA的表達(dá)均低于相應(yīng)假手術(shù)組(P<0.05)，而至術(shù)后14d、28d其表達(dá)增高，均高于相應(yīng)假手術(shù)組(P<0.05)。 【結(jié)論】 1.改良Rice法是建立新生兒HIBD實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的一種簡單可靠的方法。 2.腦組織在發(fā)育期損傷后兩周內(nèi)表現(xiàn)為較強(qiáng)的神經(jīng)可塑性，隨著神經(jīng)元進(jìn)一步變性壞死，當(dāng)