新生鼠缺氧缺血性腦損傷后神經可塑性及其相關抑制因素的變化.pdf

1、【目的】 1.建立新生兒HIBD實驗動物模型； 2.觀察發(fā)育期腦損傷后神經可塑性的改變； 3.探討神經可塑性改變與學習記憶能力的關系： 4.觀察神經可塑性相關抑制因素ncurocan在發(fā)育期腦損傷后的變化； 5.探討ncurocan對神經可塑性的影響。 【方法】 1.7d齡SD大鼠隨機分為假手術組和HIBD組，采用改良Rice法建立新生兒HIBD動物模型，通過行為學和一般狀態(tài)評分進

2、行篩選，同時分別取腦組織進行HE染色和透射電鏡觀察其組織病理學及神經超微結構變化。 2.假手術組和HIBD組又隨機分為術后1d、4d、7d、14d、28d組，通過免疫組化染色及RT-PCR法檢測新生鼠HIBD后突觸素蛋白及mRNA水平的動態(tài)變化以反映神經可塑性的變化。 3.通過Y臂迷宮實驗檢測新生鼠HIBD后學習分辨及記憶能力的變化。 4.通過免疫組化染色及RT-PCR法檢測新生鼠HIBD 1d、4d、7d、14

3、d、28d后neurocan在蛋白及mRNA水平的動態(tài)變化。 【結果】 1.HE染色發(fā)現HIBD組術后4d病變較為嚴重，可見結扎側大腦組織出現大片壞死，細胞溶解、消失，術后7d病灶周圍開始出現膠質增生，術后14d、28d神經元大量丟失，最后由膠質瘢痕取代。 2.透射電鏡觀察見HIBD組神經元呈部分核膜消失，線粒體腫脹，神經元突起可見灶性壞死，突觸及突觸囊泡數量減少、結構破壞。 3.假手術組突觸素表達水平隨

4、日齡增加逐漸增高(P<0.05)。而HIBD組術后4d突觸素免疫活性增高，于術后7d時達到高峰，兩組均高于相應假手術組(P<0.05)；此后HIBD組突觸素免疫活性開始下降，至術后14d、28d已經明顯低于相應假手術組(P<0.05)。RT-PCR發(fā)現突觸素mRNA表達有相同的結果(P<0.05)。 4.HIBD術后14d、28d組大鼠在Y臂迷宮實驗中學習分辨和記憶能力均差于假手術14d、28d組(P<0.05)。 5.假手術組

5、neurocan的表達于術后7d達到高峰(P<0.05)，此后陽性表達逐漸減少；HIBD術后4d、7d組neurocan蛋白及其mRNA的表達均低于相應假手術組(P<0.05)，而至術后14d、28d其表達增高，均高于相應假手術組(P<0.05)。 【結論】 1.改良Rice法是建立新生兒HIBD實驗動物模型的一種簡單可靠的方法。 2.腦組織在發(fā)育期損傷后兩周內表現為較強的神經可塑性，隨著神經元進一步變性壞死，當