山羊地方性鼻內(nèi)腫瘤病毒陜西株序列分析及Gag和Su蛋白多克隆抗體的制備.pdf_第1頁(yè)
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1、羊地方性鼻內(nèi)腫瘤病毒(Enzootic nasal tumor virus,ENTV)是羊地方性鼻內(nèi)腺瘤(Enzootic nasal adenocarcinoma,ENA)的病原,可導(dǎo)致鼻甲骨篩骨上皮細(xì)胞的致瘤性轉(zhuǎn)化。ENTV-1感染綿羊,ENTV-2感染山羊。因?yàn)槿鄙俑腥拘苑肿涌寺『蜔o(wú)法培養(yǎng)病毒,ENTV在ENA發(fā)病機(jī)理中的作用尚未被完全揭示,GenBank中收錄的ENTV全基因組也很少。在中國(guó)該病主要流行于內(nèi)蒙古、湖南、四川、重慶

2、、陜西等多個(gè)省市。為了深入研究ENTV,本研究對(duì)陜西省疑似ENA的山羊進(jìn)行診斷,建立了RT-PCR檢測(cè)方法,對(duì)陜西省不同地區(qū)的4株ENTV-2進(jìn)行全基因分段克隆和序列分析,并制備了Gag和Su蛋白多克隆抗體,獲得如下研究結(jié)果:
  1.對(duì)陜西省4個(gè)山羊養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)生腫瘤的羊通過(guò)臨床癥狀觀察,剖檢和病理學(xué)觀察,確定該病為山羊地方性鼻內(nèi)腺瘤。建立ENTV-2的RT-PCR方法,對(duì)臨床樣品進(jìn)行檢測(cè),陽(yáng)性率為15.5%。
  2.通過(guò)分

3、段克隆得到陜西省4株ENTV-2的全基因,進(jìn)行序列比較分析。ENTV-2-Shaanxi1~4全基因和ENTV-2-SC株(登錄號(hào):HM104174.1)全基因核苷酸相似度達(dá)到98.2~98.7%,和ENTV-2歐洲株(登錄號(hào):AY197548.1)相似度達(dá)到89.6~89.8%。序列差異部分主要集中在LTR,gag的兩個(gè)可變區(qū),Orf-x和env的跨膜區(qū)(Transmembraneregion,Tm)序列。大部分的氨基酸差異存在于Or

4、f-x,ENTV-2-Shaanxi株和ENTV-2-SC株的Orf-x均含有108個(gè)氨基酸,而ENTV-2歐洲株含有166個(gè)氨基酸。除了Orf-x,還有Gag蛋白的兩個(gè)可變區(qū)域,ENTV-2-Shaanxi1~4株的可變區(qū)1區(qū)有6個(gè)連續(xù)的脯氨酸殘基。囊膜蛋白的跨膜區(qū),特別是胞質(zhì)尾區(qū)差異也較大,但胞質(zhì)尾部中的YXXM基序是很保守的,YXXM是PI3K的結(jié)合基序。遺傳進(jìn)化分析表明4個(gè)Shaanxi株和已發(fā)表的2株ENTV-2親緣關(guān)系最近,

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