樹(shù)突狀細(xì)胞聯(lián)合超抗原SEA激活TIL抗小鼠肝癌研究.pdf

1、目的：探討小鼠H22肝癌細(xì)胞(H22細(xì)胞)抗原致敏樹(shù)突狀細(xì)胞(dendriticcell，DC)聯(lián)合超抗原(superantigen，SAg)葡萄球菌腸毒素A(staphylococcalenterotoxinA，SEA)激活腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(tumorinfiltratinglymphocyte，TIL)體外對(duì)小鼠H22細(xì)胞殺傷活性的作用，并將H22全細(xì)胞抗原致敏的DC聯(lián)合SEA激活TIL(H22-DC-SEA-TIL)過(guò)繼免疫荷瘤小

2、鼠，探索H22-DC-SEA-TIL在抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)和抑瘤方面的作用，為肝癌的過(guò)繼免疫治療尋找新的有效方法和途徑。 方法：(1)從正常小鼠四肢骨中提取骨髓細(xì)胞，利用特異性的CD4、CD8a、CD45R單克隆抗體、補(bǔ)體緩沖液和DC的半粘附性，去除粒細(xì)胞、T細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，再用小鼠粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(murinegranulocytemarcophage-colonystimulatingf

3、actor,GM-CSF)和小鼠白細(xì)胞介素-4(murineinterleukin-4，IL-4)進(jìn)行體外培養(yǎng)，以獲得大量高純度的成熟DC。(2)用淋巴細(xì)胞分離液從荷瘤小鼠瘤體中分離提取TIL并在體外用含10％小牛血清和重組小鼠白細(xì)胞介素-2(recombinedmurineIL-2，rmIL-2)的RPMI1640完全培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增。(3)在DC培養(yǎng)過(guò)程中加入H22細(xì)胞全細(xì)胞抗原致敏DC。(4)用已致敏DC聯(lián)合SEA激活TIL。(

4、5)體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)：效應(yīng)細(xì)胞分為8組，分別是：①已致敏DC聯(lián)合SEA激活TIL組②已致敏DC激活TIL組③SEA激活TIL組④TIL組⑤已致敏DC聯(lián)合SEA激活脾淋巴細(xì)胞組⑥已致敏DC激活脾淋巴細(xì)胞組⑦SEA激活脾淋巴細(xì)胞組⑧脾淋巴細(xì)胞組⑨注射生理鹽水組；第10組為20只未荷瘤小鼠，用生理鹽水尾靜脈注射。檢測(cè)各組治療后小鼠脾淋巴細(xì)胞的NK、LAK、CTL活性及血清TNF水平，并觀察腫瘤大小及重量變化和鏡下病理改變情況。 結(jié)果：

5、(1)體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果：①各組效應(yīng)細(xì)胞對(duì)H22細(xì)胞的殺傷活性均明顯高于各自對(duì)應(yīng)效應(yīng)細(xì)胞對(duì)S180細(xì)胞的殺傷活性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。②TIL對(duì)H22細(xì)胞的殺傷活性[殺傷率為(51.21±3.00)％]高于脾淋巴細(xì)胞對(duì)H22細(xì)胞的殺傷活性[殺傷率為(19.60+2.17)％]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；用不同方式激活的TIL對(duì)H22細(xì)胞的殺傷活性均高于各自對(duì)應(yīng)方式激活的脾淋巴細(xì)胞對(duì)H22細(xì)胞的殺傷活性，差異有統(tǒng)計(jì)

6、學(xué)意義(P<0.01)。③SEA激活的TIL對(duì)H22細(xì)胞的殺傷活性[殺傷率為(62.70±2.42)％]與TIL對(duì)H22細(xì)胞的殺傷活性[殺傷率為(51.21±3.00)％]比較相對(duì)較高，已致敏DC激活的TIL對(duì)H22細(xì)胞的殺傷活性更高[殺傷率為(75.23±2.71)％]，而已致敏DC聯(lián)合SEA激活的TIL對(duì)H22細(xì)胞的殺傷活性最高[殺傷率為(85.66±2.62)％]，它們之間相互比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。(2)過(guò)繼免疫

7、治療荷瘤小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果：①已致敏DC聯(lián)合SEA激活TIL可明顯誘導(dǎo)提高小鼠脾淋巴細(xì)胞NK、LAK和CTL活性，其活性分別為(34.23±1.52)％、(35.50±1.89)％、(39.83±1.55)％，其血清TNF水平為(46.24±1.26)U/ml，與已致敏DC激活TIL組、SEA激活TIL組、TIL組、已致敏DC聯(lián)合SEA激活脾淋巴細(xì)胞組、已致敏DC激活脾淋巴細(xì)胞組、SEA激活脾淋巴細(xì)胞組、脾淋巴細(xì)胞組和注射生理鹽水的荷瘤小鼠組

8、相應(yīng)指標(biāo)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)；而與注射生理鹽水的未荷瘤小鼠比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。②荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)情況：已致敏DC聯(lián)合SEA激活TIL治療組可觀察到腫瘤的生長(zhǎng)明顯受到抑制，其治療后的腫瘤大小為(0.402±0.10)cm、瘤重為(0.394±0.11)g和抑瘤率為79.39％，與其余各治療組相比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。③病理切片可見(jiàn)已致敏DC聯(lián)合SEA激活TIL治療組瘤體組織內(nèi)大量淋