N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶-V與前列腺癌惡性生物學(xué)行為的關(guān)系.pdf

1、一、研究背景:
　　 生物體內(nèi)的大多數(shù)蛋白質(zhì)都以糖蛋白的形式存在，細(xì)胞膜上的糖蛋白糖鏈結(jié)構(gòu)與腫瘤的粘附、入侵及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶(N-acetylglucosaminyl-transferase-V,GnT-V)為糖蛋白N-糖鏈加工酶之一，起著決定N-糖鏈類(lèi)型及復(fù)雜型糖鏈結(jié)構(gòu)的重要作用，主要分布在高爾基體中，能催化形成N-糖鏈的β-1,6分支，β-1,6-N-乙酰氨基葡萄糖分支在腫瘤組織含量豐富，與腫瘤的轉(zhuǎn)移

2、、惡性轉(zhuǎn)化等生物學(xué)活性密切相關(guān)。GnT-V影響腫瘤生物活性主要是通過(guò)改變細(xì)胞表面糖蛋白如鈣黏蛋白、整合素及細(xì)胞表面生長(zhǎng)因子受體的β-1,6分支結(jié)構(gòu)。另外分泌型GnT-V在腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)中有一種引起腫瘤血管生成的新功能，而且與糖基轉(zhuǎn)移酶催化活性無(wú)關(guān)。GnT-V活性在許多惡性腫瘤組織中表達(dá)增高，如乳腺癌、結(jié)腸癌和肝癌。人乳腺癌細(xì)胞系中，GnT-V表達(dá)與腫瘤的大小成正相關(guān);高轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌細(xì)胞株中，GnT-V活性與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移能力成正相關(guān)。然而，

3、在非小細(xì)胞肺癌和膀胱癌中，GnT-V的表達(dá)量越低，腫瘤的惡性程度反而越高。因此，GnT-V在不同腫瘤中的作用是不一樣的。
　　 前列腺癌是泌尿生殖系最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病隨年齡而增長(zhǎng)，其發(fā)病率有明顯的地區(qū)差異，歐美地區(qū)較高。據(jù)報(bào)道僅次于肺癌，在男性是癌癥死亡的第二位。前列腺癌主要治療手段有根治性手術(shù)和內(nèi)分泌治療、放療及化療。根治術(shù)后復(fù)發(fā)、發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及無(wú)法耐受手術(shù)的患者多選擇內(nèi)分泌治療。接受內(nèi)分泌治療的患者，大多數(shù)起初有效，

4、但經(jīng)過(guò)中位時(shí)間14～30個(gè)月后，幾乎都將逐漸發(fā)展為激素非依賴(lài)性前列腺癌或激素難治性前列腺癌。如何有效地治療激素非依賴(lài)性前列腺癌或激素抵抗性前列腺癌依然是基礎(chǔ)和臨床研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)?；煶Ｓ糜诩に胤且蕾?lài)性前列腺癌，但對(duì)患者的治療效果仍有限。而放射治療可對(duì)局限性前列腺癌進(jìn)行根治性放療，也可作為手術(shù)治療的輔助治療和晚期患者的姑息性治療。但臨床發(fā)現(xiàn)部分病人因放療抵抗導(dǎo)致放療后局部復(fù)發(fā)，以致患者預(yù)后不佳。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的和前列腺癌細(xì)胞放射敏感性有關(guān)的預(yù)

5、測(cè)分子有Raf激酶抑制白，PAK6蛋白和DAB2IP基因等。但是目前為止尚未有一個(gè)公認(rèn)的標(biāo)志性分子能預(yù)測(cè)前列腺癌細(xì)胞的放射敏感性。
　　 二、研究目的:
　　 雖然很多研究表明GnT-V和多種腫瘤的惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)，但是目前關(guān)于GnT-V與前列腺癌惡性生物學(xué)行為的相關(guān)研究較少，因此在本研究中，我們采用免疫組化檢測(cè)GnT-V在前列腺癌組織中的表達(dá)情況，以期探討GnT-V在前列腺癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用。同時(shí)我們利用

6、shRNA，下調(diào)前列腺癌細(xì)胞PC3中GnT-V的表達(dá)量，得到了低表達(dá)GnT-V的細(xì)胞株P(guān)C3GnT-V/1564及PC3GnT-V/1079。通過(guò)體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)對(duì)比正常的前列腺癌細(xì)胞和低表達(dá)GnT-V的前列腺癌細(xì)胞的放射敏感性，更重要的是，還研究了GnT-V對(duì)前列腺癌細(xì)胞放射敏感性的內(nèi)在機(jī)制。
　　 三、實(shí)驗(yàn)方法:
　　 1、前列腺癌組織芯片制作:由陜西超英生物科技有限公司完成。
　　 2、pGPU6/GFP/N

7、eoGnT-VshRNA質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定:由上海吉瑪公司完成。
　　 3、細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
　　 人前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3在37℃5％CO2條件下，培養(yǎng)于含10％新生牛血清的RPMI-1640中，每周傳代2～3次。PC3細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，參照invitrogen公司Lipofectamine2000TM產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)，用脂質(zhì)體Lipofectamine2000TM將質(zhì)粒導(dǎo)入PC3細(xì)胞。用G418篩選陽(yáng)性細(xì)胞克隆。
　　

8、 4、干擾效果檢測(cè)
　　 (1)RT-PCR測(cè)定GnT-VmRNA
　　 用Trizol提取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的單層培養(yǎng)細(xì)胞總RNA，采用AMV逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA.GnT-V上游引物為5'GAGCAGATCCTGGACCTCAG3'，下游引物為5'GCTGTCATGACTCCAGCGTA3'。使用β-actin作為內(nèi)參，上游引物為5'GAAACTACCTTCAACTCCATC3'，下游引物為5'CGAGGCCAGGATGGAG

9、CCGCC3'。反應(yīng)條件為:95℃預(yù)變性30s，PCR:94℃5s，60℃30s，共40個(gè)循環(huán)，溶解曲線:95℃0s，65℃60s，95℃0s.
　　 基于目的基因和看家基因?qū)崟r(shí)熒光定量擴(kuò)增曲線得到Ct(C為Cycle，t為threshold)值，△CT代表目的基因相對(duì)于內(nèi)參基因的表達(dá)強(qiáng)度，公式為△CT=Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因。用Folds=2-△△Ct表示實(shí)驗(yàn)組目的基因與對(duì)照組目的基因表達(dá)量的倍比關(guān)系，△△Ct=△CT實(shí)驗(yàn)

10、組-△CT對(duì)照組。目的基因?yàn)镚nT-V，內(nèi)參基因?yàn)棣?actin。
　　 (2)Westernblot檢測(cè)GnT-V蛋白表達(dá)
　　 提取總蛋白，用測(cè)定蛋白濃度，吸取50μg總蛋白，去離子水補(bǔ)至20μL，加入等體積2×上樣buffer煮沸7min，離心后吸取30μL上樣，經(jīng)不連續(xù)SDS-PAGE電泳分離后，用半干法電轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，5％脫脂奶粉37C封閉2h，TBST洗膜后用羊抗人GnT-V蛋白多克隆抗體(1:200)

11、、羊抗人β-actin蛋白單克隆抗體(1:1000)4℃孵育過(guò)夜，洗膜后分別加入HRP標(biāo)記的兔抗羊IgG(1:500)、HRP標(biāo)記的兔抗羊IgG(1:5000)，室溫下?lián)u動(dòng)1h，洗膜后用ECL化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)檢測(cè)，暗室曝光X線片，沖洗膠片，UVI凝膠成像系統(tǒng)攝像，Image-ProPlus6.0軟件分析條帶灰度值，用GnT-V/β-actin代表GnT-V的相對(duì)表達(dá)量。
　　 5、干擾后對(duì)前列腺癌細(xì)胞放射敏感性的影響
　　

12、(1)平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)pGPU6/GFP/NeoGnT-VshRNA干擾后對(duì)PC3細(xì)胞放射敏感性的影響
　　 取各組對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的待測(cè)細(xì)胞，接種于6孔板，24h后分別給予0Gy,2Gy,4Gy,6Gy,8Gy五個(gè)計(jì)量點(diǎn)照射，之后置于37℃5％CO2條件下靜止培養(yǎng)3周，待出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)克隆時(shí)，終止培養(yǎng)，加入0.1％結(jié)晶紫染色，肉眼計(jì)數(shù)。通過(guò)克隆數(shù)計(jì)算出細(xì)胞生存分?jǐn)?shù)。實(shí)驗(yàn)分為PC3組，PC3GnT-V/NC組，PC3GnT-V/10

13、79組和PC3GnT-V/1564組，每組重復(fù)例數(shù)為9。
　　 (2)CCK-8法測(cè)定pGPU6/GFP/NeoGnT-VshRNA干擾后對(duì)PC3細(xì)胞單次6Gy照射后增殖能力的影響。
　　 取各組對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的待測(cè)細(xì)胞，消化，計(jì)數(shù)，制備單細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液稀釋成終濃度為1×105個(gè)/ml接種子96孔板，每孔1×104個(gè)細(xì)胞，每組細(xì)胞6個(gè)復(fù)孔，鋪板后置于37℃5％CO2條件下靜止培養(yǎng)24h，給予6Gy照射。CCK-8法分析

14、不同時(shí)間點(diǎn)(0h、24h、48h、72h、96h)的細(xì)胞活力，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別檢測(cè)6個(gè)復(fù)孔。測(cè)量?jī)山M的OD450nm值，繪制生長(zhǎng)曲線，并計(jì)算干擾組的生長(zhǎng)抑制率。細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率(IR)=（對(duì)照組OD450值-干擾組OD450值）/對(duì)照組OD450值×100％。實(shí)驗(yàn)分為PC3組，PC3GnT-V/NC組，PC3GnT-V/1079組和PC3GnT-V/1564組，每組重復(fù)例數(shù)為18。
　　 (3)Hoechst33258核染色及流式細(xì)

15、胞術(shù)檢測(cè)pGPU6/GFP/NeoGnT-VshRNA干擾對(duì)PC3細(xì)胞照射前后凋亡的影響。
　　 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，給予0Gy及6Gy照射，72h后移去培養(yǎng)基，用1×pBS洗2次，4％多聚甲醛液室溫固定20min，移去固定液，用PBS清洗2次，然后室溫孵育終濃度1ug/ml的Hoeehst33258染色液5分鐘。孵育完畢后用PBS簡(jiǎn)單清洗2次，吸盡液體，滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上貼有細(xì)胞的蓋玻片。然后在熒光顯微鏡下

16、觀察細(xì)胞核形態(tài)。實(shí)驗(yàn)分為PC3組，PC3GnT-V/NC組和PC3GnT-V/1079組，每組重復(fù)例數(shù)為9。
　　 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，給予0Gy及6Gy照射，72h后消化細(xì)胞，1×PBS洗3遍，取1×105個(gè)細(xì)胞，加入195μLAnnexinvPE結(jié)合液重懸細(xì)胞，再加入5μLAnnexinvPE和1μL7-AAD輕輕混勻，室溫避光孵育10分鐘。1000rpm/min離心5分鐘，棄上清，加入200μLAnnexinvPE結(jié)合液重

17、懸細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)分為PC3GnT-V/NC組和PC3GnT-V/1079組，每組重復(fù)例數(shù)為9。
　　 (4)比色分析法測(cè)定Caspase-3活性
　　 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，給予6Gy照射，24、48、72h后，消化離心，預(yù)冷的裂解緩沖液冰上裂解細(xì)胞20min。4C20000×g離心3min，收集上清與Caspase-3底物DEVD-P-NA以及反應(yīng)緩沖液混合，37℃孵育4h，用96孔板在酶標(biāo)儀405nm比色。

18、PBS作為陰性對(duì)照組。重復(fù)3次。樣品OD(405nm)值與對(duì)照樣品OD(405nm)值的比值為Caspase-3活性的百分率。實(shí)驗(yàn)分為PC3組，PC3GnT-V/NC組和PC3GnT-V/1079組，每組重復(fù)例數(shù)為9。
　　 (5)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)pGPU6/GFP/NeoGnT-VshRNA干擾對(duì)PC3細(xì)胞照射前后周期的影響。
　　 取各組對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的待測(cè)細(xì)胞，給予0Gy，2Gy，6Gy，10Gy照射，72h后消化細(xì)胞，

19、1×pBS洗3遍，取1×106個(gè)細(xì)胞，加入2ml于-20℃預(yù)冷的70％乙醇，4℃冰箱過(guò)夜。染色前用PBS離心沉淀去除固定液，冷PBS洗2次。加入100μLRNA酶RNaseA，37℃水后冰上終止RNaseA作用。每ml細(xì)胞懸液加入50μg/ml碘化丙啶PI染色液100μL混勻，4℃避光30min。流式細(xì)胞儀檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)分為PC3GnT-V/NC組和PC3GnT-V/1079組，每組重復(fù)例數(shù)為9。
　　 (6)Westernblot

20、檢測(cè)pGPU6/GFP/NeoGnT-VshRNA對(duì)PC3細(xì)胞照射前后凋亡相關(guān)蛋白的改變
　　 提取總蛋白，測(cè)定蛋白濃度，吸取50μg總蛋白，用PBS補(bǔ)至20μL，加入5μL5×SDS上樣buffer煮沸5min，離心后吸取25μL上樣，經(jīng)不連續(xù)SDS-PAGE電泳分離后，用半干法電轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，5％脫脂奶粉37℃封閉2h，TBST洗膜后用羊抗人bcl-2蛋白多克隆抗體(1:300)、羊抗人bcl-xl蛋白多克隆抗體(1:

21、200)、羊抗人bax蛋白單克隆抗體(1:200)、羊抗人β-actin蛋白單克隆抗體(1:1000)4℃孵育過(guò)夜，洗膜后分別加入HRP標(biāo)記的兔抗羊IgG(1:500)、HRP標(biāo)記的兔抗羊IgG(1:5000)，室溫下?lián)u動(dòng)1h，洗膜后用ECL化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)檢測(cè)，暗室曝光X線片，沖洗膠片，UVI凝膠成像系統(tǒng)攝像，Image-ProPlus6.0軟件分析條帶灰度值，用bax/β-actin代表bax的相對(duì)表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)分為PC3組，PC3GnT

22、-V/NC組和PC3GnT-V/1079組，每組重復(fù)例數(shù)為3。
　　 6、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
　　 (1)裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)
　　 6周齡BALB/c裸鼠，雄性。每組各16只。細(xì)胞重懸于RPMI-1640，調(diào)整細(xì)胞濃度為2.5×107/ml，按200tL/只進(jìn)行臀部皮下注射。當(dāng)腫瘤體積達(dá)200-300mm3，隨機(jī)分為兩組即處理組和對(duì)照組，處理組給予2Gy照射連續(xù)5天，對(duì)照組不照射。照射后每隔3d測(cè)量腫瘤長(zhǎng)徑和短徑，按V=0.5a

23、b2(V代表腫瘤體積，a為長(zhǎng)徑，b為短徑)繪制生長(zhǎng)曲線，并記錄裸鼠生存時(shí)間。
　　 (2)生存分析
　　 每組取10只裸鼠，建立裸鼠成瘤模型（具體方法同前），記錄每只裸鼠的生存天數(shù)。
　　 7、免疫組化
　　 組織芯片及石蠟切片脫蠟和水化后，對(duì)組織抗原進(jìn)行相應(yīng)的修復(fù)。切片加內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑，室溫下孵育10分鐘，加動(dòng)物非免疫血清（兔/鼠），室溫下孵育20分鐘。除去血清，每張切片加一滴一抗(GnT-V多

24、克隆抗體(1:200)、(Bax單克隆抗體(1:200)、Bci-2多克隆抗體(1:300)、Bcl-xl多克隆抗體(1:300))，室溫下孵育60分鐘。切片加生物素標(biāo)記的兔抗羊IgG，室溫下孵育10分鐘。除去PBS液，每張切片加鏈霉菌抗生素蛋白-過(guò)氧化酶，室溫下孵育10分鐘。沖洗后滴新鮮配制的DAB溶液，顯微鏡下觀察。自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染。
　　 6、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果均經(jīng)SPSS13.0軟件統(tǒng)計(jì)。所給數(shù)據(jù)為

25、均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差。以P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)時(shí)定量RT-PCR、Western-Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果多組比較采用one-wayANOVA分析。平板克隆實(shí)驗(yàn)、CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)多組比較采用析因設(shè)計(jì)的方差分析;組內(nèi)多重比較若方差不齊采用DunnettT3法、若方差齊采用LSD法;兩組間的比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。Caspase-3活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。皮下成瘤試驗(yàn)瘤體體積采用重復(fù)測(cè)量的方差

26、分析;組內(nèi)比較采用one-wayANOVA分析;組內(nèi)的多重比較若方差不齊采用DunnettT3法、若方差齊采用LSD法。三組生存時(shí)間的比較采用Kaplan-Merer法分析。參數(shù)比較均先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，若方差不齊，用基于方差不齊的近似F檢驗(yàn)Welch法。
　　 四、結(jié)果:
　　 1、重組質(zhì)粒的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染
　　 質(zhì)粒pGPU6/GFP/Neo中含有編碼GFP的基因，故轉(zhuǎn)染細(xì)胞在熒光顯微鏡下可激發(fā)出綠色熒光。在熒光顯

27、微鏡下觀察，所有轉(zhuǎn)染細(xì)胞均發(fā)熒光，說(shuō)明穩(wěn)定轉(zhuǎn)染成功。
　　 2、干擾效果檢測(cè)
　　 實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出PC3GnT-V/1564和PC3GnT-V/1079組細(xì)胞GnT-V基因的表達(dá)較PC3GnT-V/NC組明顯降低，表明轉(zhuǎn)染GnT-VshRNA載體能抑制目的基因mRNA表達(dá)，Westernblot結(jié)果也顯示轉(zhuǎn)染GnT-VshRNA載體能抑制GnT-V蛋白表達(dá)。Image-ProPlus6.0軟件分析GnT-V基

28、因mRNA及蛋白的表達(dá)水平，按照公式進(jìn)行計(jì)算后顯示PC3GnT-V/1079、PC3GnT-V/1564組mRNA水平的抑制率分別為78.3％和66.8％，蛋白水平的抑制率分別為73.7％和57.9％，與PC3GnT-V/NC組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。
　　 3、GnT-VshRNA對(duì)細(xì)胞放射敏感性的影響
　　 (1)、以細(xì)胞在不同照射劑量(0Gy,2Gy,4Gy,6Gy,8Gy)的克隆形成率繪制細(xì)胞生成率

29、曲線，PC3GnT-V/1564及PC3GnT-V/1079組的生存率較PC3組及PC3GnT-V/NC組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而PC3GnT-V/1564及PC3GnT-V/1079組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明下調(diào)GnT-V的表達(dá)后細(xì)胞的放射敏感性增高。
　　 (2)、以細(xì)胞在6Gy放療后不同時(shí)間點(diǎn)(0h、24h、48h、72h、96h)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，PC3GnT-V/1564及PC3GnT-V/1079的生長(zhǎng)抑制率較PC

30、3組及PC3GnT-V/NC組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而PC3GnT-V/1564及PC3GnT-V/1079組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。可見(jiàn)下調(diào)GnT-V的表達(dá)后細(xì)胞的放射敏感性增高。因PC3GnT-V/1564與PC3GnT-V/1079組細(xì)胞GnT-V蛋白表達(dá)量相差約10％，其差異不足以影響其放射敏感性（根據(jù)平板克隆實(shí)驗(yàn)及CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果）。選擇干擾效率較高的PC3GnT-V/1079進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)（在做了平板克隆實(shí)驗(yàn)及CCK-8實(shí)驗(yàn)

31、之后）。
　　 4、GnT-VshRNA對(duì)細(xì)胞放療前后凋亡的影響
　　 Hoechst33258及流式細(xì)胞AnnexinV-PE/7-AAD法測(cè)定放射前后細(xì)胞的凋亡。放射治療前PC3GnT-V/NC組、PC3GnT-V/1079組細(xì)胞的凋亡率分別為:(1.52±0.43)％、(8.81±0.65)％;放射治療后PC3GnT-V/NC組、PC3GnT-V/1079組細(xì)胞的凋亡率分別為:(9.21±0.23)％、(21.39

32、±1.72)％。下調(diào)GnT-V可提高PC3細(xì)胞放療后的凋亡率。
　　 5、GnT-VshRNA對(duì)細(xì)胞放療后caspase-3活性的影響
　　 PC3GnT-V/1079組caspase-3活性在放療后24h、48h及72h均高于PC3、PC3GnT-V/NC組。
　　 6、GnT-VshRNA對(duì)細(xì)胞放療前后周期的影響
　　 PC3GnT-V/NC組細(xì)胞照射后可見(jiàn)明顯G2/M阻止;PC3GnT-V/1079

33、組細(xì)胞照射后無(wú)明顯G2/M期阻止。
　　 7、GnT-VshRNA對(duì)裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)的影響
　　 X線照射后，PC3GnT-V/1079體積增長(zhǎng)較PC3和PC3GnT-V/NC速度慢，差異顯著。PC3GnT-V/1079生存期較PC3和PC3GnT-V/NC長(zhǎng)。
　　 免疫組化實(shí)驗(yàn)示:Bcl-2表達(dá)于胞漿及細(xì)胞核中，PC3GnT-V/1079表達(dá)量低于PC3GnT-V/NC;Bax表達(dá)于胞漿，PC3GnT-V/1

34、079表達(dá)量高于PC3GnT-V/NC;Bcl-xl表達(dá)于胞漿，PC3GnT-V/1079及PC3GnT-V/NC表達(dá)量無(wú)明顯差異。
　　 8、GnT-VshRNA對(duì)細(xì)胞放射前后凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PC3GnT-V/1079組細(xì)胞在放射治療后Bax表達(dá)量高于PC3及PC3GnT-V/NC組;Bcl-2表達(dá)量低于PC3及PC3GnT-V/NC組。
　　 9、免疫組化檢測(cè)GnT-V在前列腺癌組

35、織中的表達(dá)
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn):GnT-V在5例前列腺增生組織中不表達(dá)，在85例前列腺癌組織中其中83例有表達(dá)。且GnT-V在前列腺癌組織中的表達(dá)隨前列腺癌病理分化程度降低而升高，隨著臨床分期及Gleason評(píng)分增高而升高。
　　 五、結(jié)論:
　　 1、GnT-V在前列腺增生組織中不表達(dá)，在前列腺癌組織中的表達(dá)隨前列腺癌病理分級(jí)、臨床分期及Gleason評(píng)分增高而升高。
　　 2、靶向GnT-V的shRN