唾液酸受體在新城疫病毒神經(jīng)嗜性中的作用.pdf

1、新城疫是由禽副黏病毒1型（Avian paramyxovirus serotype1，APMV-1）引起的禽類傳染病，與禽流感并稱危害養(yǎng)禽業(yè)最嚴重的兩大疫病。依據(jù)新城疫病毒對雞的致病性或毒力的不同而分為三種類型:速發(fā)型（Velogenic，強毒）、中發(fā)型（Mesogenic，中強毒）和緩發(fā)型（Lentogenic，弱毒）。根據(jù)強毒株對雞的臨床病理特征及其對機體組織的嗜性進一步將其分為兩種類型:嗜神經(jīng)型(Neurotropic velog

2、enic)和嗜內臟型(Viscerotropicvelogenic)。其中，嗜神經(jīng)型強毒株引起的神經(jīng)系統(tǒng)病變會出現(xiàn)非化膿性腦炎而導致顯著的中樞神經(jīng)紊亂，如扭頸、頭頸震顫、轉圈、腿或翅膀麻痹和癱瘓等癥狀，其雛雞死亡率可達90％以上。生產上多見的神經(jīng)型新城疫往往是雞群發(fā)病后的后遺癥，出現(xiàn)神經(jīng)癥狀的家禽很難康復，長期處于疾病狀態(tài)。唾液酸((Sialic acid，SA)作為NDV的受體被認為是決定NDV感染的宿主范圍和組織嗜性的重要因素，但是

3、SA受體對NDV神經(jīng)感染的作用并不清楚。本研究通過運用凝集素染色等技術探究唾液酸受體對NDV神經(jīng)嗜性的作用，力求為新城疫病毒的神經(jīng)嗜性和致病機理研究提供有價值的線索。本論文的主要研究結果如下:
　　1.強弱毒株感染引起雞腦組織的臨床癥狀和病理變化
　　將4周齡的SPF雞分別感染NDV強毒株F48E9和弱毒疫苗株LaSota，并設立正常（未感染）對照組。感染強毒株F48E9的SPF雞出現(xiàn)咳嗽，呼吸困難，哮喘，食欲不振，腹瀉，嗉

4、囊積液，以及嚴重的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，如頸部扭轉，無外界刺激反應，單側腿麻痹且全部于3～5dpi之間死亡。HE染色顯示，強毒株F48E9引起雞大腦神經(jīng)元變性壞死，膠質細胞增生，神經(jīng)纖維空泡化，呈現(xiàn)套管現(xiàn)象等典型的腦炎病理變化。感染弱毒株LaSota組和對照組在臨床癥狀和病理變化上均未發(fā)現(xiàn)任何異常。
　　2.強弱毒株在雞中樞神經(jīng)系統(tǒng)的復制差異
　　通過TCID50和EID50檢測1，3和5 dpi的NDV在雞中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中

5、的滴度，結果表明強毒株F48E9可在大腦，小腦和脊髓有效地復制，且大腦內病毒復制更為敏感。但在感染LaSota毒株的雞CNS中未檢測到病毒。數(shù)據(jù)表明強弱毒株在CNS的復制具有顯著差異，且弱毒株不能有效復制。然而在感染的體外培養(yǎng)雞原代神經(jīng)元細胞中，弱毒株LaSota能夠復制，但是復制能力相對較弱。這些結果表明，NDV強毒株在神經(jīng)系統(tǒng)和神經(jīng)元細胞中能有效復制，但是弱毒株可能喪失了復制能力或不能有效復制。
　　3.唾液酸受體在CNS和雞

6、原代神經(jīng)細胞上的表達
　　分別取各組雞的腦組織進行免疫組化和免疫熒光染色分析。雞腦組織中的SAα2，3Gal和SAα2，6Gal可分別被凝集素MAA和SNA染色。結果表明，在感染組和對照組腦組織中均檢測到兩種SA受體，雞腦中不同區(qū)域的SA分布略有不同，但不同組間分布區(qū)域與豐度無顯著差異。
　　4.SA受體是NDV感染神經(jīng)細胞所必需的
　　首先，將感染后的腦組織和原代神經(jīng)細胞進行NDV與唾液酸雙熒光染色，結果顯示NDV與

7、唾液酸能夠共定位。其次，為了研究NDV與神經(jīng)細胞的結合能力，將雞原代神經(jīng)元細胞與NDV強弱毒株在4℃下孵育。PBS洗滌細胞后收集細胞，并用EID50法測定結合的病毒。結果顯示F48E9株和LaSota株都能夠與神經(jīng)元細胞結合，且神經(jīng)細胞結合的兩種病毒滴度沒有顯著差異，說明強弱毒株具有相似的細胞結合能力。用神經(jīng)氨酸酶處理法將雞原代神經(jīng)元細胞表面的SA去除后測定NDV的結合和復制能力，結果顯示與對照組相比，所有處理組中細胞結合病毒數(shù)量均顯著