唾液酸受體在新城疫病毒神經(jīng)嗜性中的作用.pdf

1、新城疫是由禽副黏病毒1型（Avian paramyxovirus serotype1，APMV-1）引起的禽類傳染病，與禽流感并稱危害養(yǎng)禽業(yè)最嚴(yán)重的兩大疫病。依據(jù)新城疫病毒對雞的致病性或毒力的不同而分為三種類型:速發(fā)型（Velogenic，強(qiáng)毒）、中發(fā)型（Mesogenic，中強(qiáng)毒）和緩發(fā)型（Lentogenic，弱毒）。根據(jù)強(qiáng)毒株對雞的臨床病理特征及其對機(jī)體組織的嗜性進(jìn)一步將其分為兩種類型:嗜神經(jīng)型(Neurotropic velog

2、enic)和嗜內(nèi)臟型(Viscerotropicvelogenic)。其中，嗜神經(jīng)型強(qiáng)毒株引起的神經(jīng)系統(tǒng)病變會出現(xiàn)非化膿性腦炎而導(dǎo)致顯著的中樞神經(jīng)紊亂，如扭頸、頭頸震顫、轉(zhuǎn)圈、腿或翅膀麻痹和癱瘓等癥狀，其雛雞死亡率可達(dá)90％以上。生產(chǎn)上多見的神經(jīng)型新城疫往往是雞群發(fā)病后的后遺癥，出現(xiàn)神經(jīng)癥狀的家禽很難康復(fù)，長期處于疾病狀態(tài)。唾液酸((Sialic acid，SA)作為NDV的受體被認(rèn)為是決定NDV感染的宿主范圍和組織嗜性的重要因素，但是

3、SA受體對NDV神經(jīng)感染的作用并不清楚。本研究通過運(yùn)用凝集素染色等技術(shù)探究唾液酸受體對NDV神經(jīng)嗜性的作用，力求為新城疫病毒的神經(jīng)嗜性和致病機(jī)理研究提供有價(jià)值的線索。本論文的主要研究結(jié)果如下:
　　1.強(qiáng)弱毒株感染引起雞腦組織的臨床癥狀和病理變化
　　將4周齡的SPF雞分別感染NDV強(qiáng)毒株F48E9和弱毒疫苗株LaSota，并設(shè)立正常（未感染）對照組。感染強(qiáng)毒株F48E9的SPF雞出現(xiàn)咳嗽，呼吸困難，哮喘，食欲不振，腹瀉，嗉

4、囊積液，以及嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，如頸部扭轉(zhuǎn)，無外界刺激反應(yīng)，單側(cè)腿麻痹且全部于3～5dpi之間死亡。HE染色顯示，強(qiáng)毒株F48E9引起雞大腦神經(jīng)元變性壞死，膠質(zhì)細(xì)胞增生，神經(jīng)纖維空泡化，呈現(xiàn)套管現(xiàn)象等典型的腦炎病理變化。感染弱毒株LaSota組和對照組在臨床癥狀和病理變化上均未發(fā)現(xiàn)任何異常。
　　2.強(qiáng)弱毒株在雞中樞神經(jīng)系統(tǒng)的復(fù)制差異
　　通過TCID50和EID50檢測1，3和5 dpi的NDV在雞中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中

5、的滴度，結(jié)果表明強(qiáng)毒株F48E9可在大腦，小腦和脊髓有效地復(fù)制，且大腦內(nèi)病毒復(fù)制更為敏感。但在感染LaSota毒株的雞CNS中未檢測到病毒。數(shù)據(jù)表明強(qiáng)弱毒株在CNS的復(fù)制具有顯著差異，且弱毒株不能有效復(fù)制。然而在感染的體外培養(yǎng)雞原代神經(jīng)元細(xì)胞中，弱毒株LaSota能夠復(fù)制，但是復(fù)制能力相對較弱。這些結(jié)果表明，NDV強(qiáng)毒株在神經(jīng)系統(tǒng)和神經(jīng)元細(xì)胞中能有效復(fù)制，但是弱毒株可能喪失了復(fù)制能力或不能有效復(fù)制。
　　3.唾液酸受體在CNS和雞

6、原代神經(jīng)細(xì)胞上的表達(dá)
　　分別取各組雞的腦組織進(jìn)行免疫組化和免疫熒光染色分析。雞腦組織中的SAα2，3Gal和SAα2，6Gal可分別被凝集素MAA和SNA染色。結(jié)果表明，在感染組和對照組腦組織中均檢測到兩種SA受體，雞腦中不同區(qū)域的SA分布略有不同，但不同組間分布區(qū)域與豐度無顯著差異。
　　4.SA受體是NDV感染神經(jīng)細(xì)胞所必需的
　　首先，將感染后的腦組織和原代神經(jīng)細(xì)胞進(jìn)行NDV與唾液酸雙熒光染色，結(jié)果顯示NDV與

7、唾液酸能夠共定位。其次，為了研究NDV與神經(jīng)細(xì)胞的結(jié)合能力，將雞原代神經(jīng)元細(xì)胞與NDV強(qiáng)弱毒株在4℃下孵育。PBS洗滌細(xì)胞后收集細(xì)胞，并用EID50法測定結(jié)合的病毒。結(jié)果顯示F48E9株和LaSota株都能夠與神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)合，且神經(jīng)細(xì)胞結(jié)合的兩種病毒滴度沒有顯著差異，說明強(qiáng)弱毒株具有相似的細(xì)胞結(jié)合能力。用神經(jīng)氨酸酶處理法將雞原代神經(jīng)元細(xì)胞表面的SA去除后測定NDV的結(jié)合和復(fù)制能力，結(jié)果顯示與對照組相比，所有處理組中細(xì)胞結(jié)合病毒數(shù)量均顯著