香菇C91-3蛋白LFP91-3-A抗腫瘤機(jī)制的初步研究及其一級(jí)結(jié)構(gòu)的測(cè)定.pdf

1、目的：香菇是名貴的食、藥兩用真菌之一，其具有調(diào)節(jié)免疫功能、抗病毒、抗腫瘤等功效。香菇C91-3是我課題組研究篩選得到的一株菌株，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其菌絲體發(fā)酵液提取的粗蛋白LFP91-3不僅具有體內(nèi)抑制腫瘤生長(zhǎng)作用還具有顯著的體外直接殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。LFP91-3-A是我課題組從香菇C91-3中分離純化得到的一種蛋白，前期的研究發(fā)現(xiàn)其可抑制H22細(xì)胞的增殖并可誘導(dǎo)H22細(xì)胞凋亡。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察LFP91-3-A是否可通過激活Caspase-3

2、及抑制端粒酶的活性誘導(dǎo)H22細(xì)胞凋亡，探討其可能的抗腫瘤作用機(jī)制；測(cè)定LFP91-3-A蛋白一級(jí)結(jié)構(gòu)，以確定其是否為一未知新蛋白。 方法：將H22細(xì)胞分為2組：對(duì)照組、10ug/ml LFP91-3-A蛋白處理組。將2組細(xì)胞分別孵育0h、24h、48h、72h后采用Caspase-3分光光度法及TRAP-PCR銀染法檢測(cè)Caspase-3和端粒酶在2組H22細(xì)胞中的活性。經(jīng)SDS-PAGE電泳LFP91-3-A蛋白，切割LFP9

3、1-3-A蛋白條帶用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜-(MALDI-TOF-MS)測(cè)定LFP91-3-A蛋白肽質(zhì)量指紋譜(PMF)通過在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中查詢識(shí)別的方式對(duì)LFP91-3-A蛋白進(jìn)行初步鑒定。用電噴霧四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(Q-TOF2)測(cè)定LFP9 1-3-A蛋白氨基酸排列順序，NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的鑒定。 結(jié)論：通過激活Caspase-3及抑制端粒酶的活性可能是LFP91-3-A蛋白誘導(dǎo)H22細(xì)胞凋