非諾貝特對(duì)大鼠局灶性腦再灌注損傷的腦保護(hù)作用.pdf

1、目的：腦缺血可引起腦組織水腫，神經(jīng)細(xì)胞壞死、凋亡，導(dǎo)致腦功能障礙。MAPK(促有絲分裂蛋白激酶)家族可分為以下三組：ERK、JNK、(C-Jun氨基末端激酶)以及P38MAPK(胞外信號(hào)調(diào)節(jié)酶)。有研究表明，MAPK在腦缺血再灌注損傷后被激活，這些激酶信號(hào)通路被認(rèn)為是造成腦缺血再灌注后致腦損傷的重要分子成份。另外，目前國(guó)內(nèi)外研究表明非諾貝特具有腦保護(hù)作用，其保護(hù)機(jī)制是否與調(diào)節(jié)JNK,ERK信號(hào)通路有關(guān)尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)研究非諾貝特對(duì)大鼠局

2、灶性腦缺血再灌注損傷的影響，并評(píng)價(jià)JNK，C—Jun氨基未端激酶和胞外信號(hào)調(diào)節(jié)酶(ERK)在非諾貝特產(chǎn)生的神經(jīng)保護(hù)中起的作用。 方法：采用大腦中動(dòng)脈線栓法(MACO)建立大鼠局灶性腦缺血再灌注模型， 60只成年SD大鼠，體重220克～250克，被隨機(jī)分為三組：假手術(shù)組(n=20)，腦缺血再灌注組(IR組，n=20)：非諾貝特預(yù)治序組(n=20)。動(dòng)物模型制備：采用線栓法，大鼠用10％水合氯醛腹腔注射麻醉，用特制的尼龍線阻斷大腦中

3、動(dòng)脈血流，2小時(shí)后抽出栓線，形成再灌注，假手術(shù)組僅暴露頸總動(dòng)脈及分叉處，不插入阻斷大腦中動(dòng)脈。各組動(dòng)物術(shù)中均用加熱板使其肛溫保持在37℃左右，術(shù)后單籠飼養(yǎng)。假手術(shù)組再灌注6小時(shí)后處死，1R組再灌注22小時(shí)后處-夕匕。非諾貝特預(yù)治療組在模型制作前14天用非諾貝特喂養(yǎng)。 本實(shí)驗(yàn)(1)測(cè)定梗死面積：各組大鼠處死后斷頭取腦，立即做冠狀切片，放入2％TTC磷酸鹽緩沖液中染色，各個(gè)腦片攝像，用HPIAS-1000圖像分析軟件計(jì)算出梗死而積。

4、(2)NDS神經(jīng)功能缺損評(píng)分(3)腦組織含水量測(cè)定：再灌注22小時(shí)后，根據(jù)Gotoh’sformala方法：腦組織含水量(％)=(濕重．干重)/濕重×100％。(4)腦組織病理觀察：光鏡下觀察所有切片，HE染色，在J E M-1200E電子顯微鏡下觀察。 (5)TUNEL檢測(cè)碉亡細(xì)胞數(shù)：玻片脫臘、乙醇水化，滴加TUNEL染色緩沖液，DAB顯色后，在光鏡44倍下選擇具有代表性的視野，計(jì)數(shù)1mm<'2>陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。(6)免疫組織化學(xué)法和免疫

5、印跡法檢測(cè)ERK和JNK的活性，免疫印跡法檢測(cè)Bcl-2和BaX的表達(dá)。取出全腦，分離出背側(cè)海馬約100毫克，勻漿后超聲粉碎，離心，轉(zhuǎn)膜，用過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗孵育，X光片上的顯色條帶進(jìn)行光密度掃描半定量分析。 結(jié)果：同假手術(shù)組比較，IR組腦梗死體積，神經(jīng)功能評(píng)分，腦組織含水量，凋亡細(xì)胞數(shù)有顯著性差異。非諾貝特組與IR組比較顯著降低了上述指標(biāo)，在分子水平上，顯著增加了JNK和ERK的表達(dá)活性，同時(shí)增加了Bax和Bcl-2基因的表