基于組分結(jié)構(gòu)理論研究鮮馬齒莧降血糖物質(zhì)基礎(chǔ).pdf

1、馬齒莧是我國(guó)衛(wèi)生部劃定藥食同源的野生植物之一，其鮮品能最大限度保留藥材中全部藥用成分和營(yíng)養(yǎng)成分，不受提取加工過程的破壞?，F(xiàn)代藥理研究表明，馬齒莧具有抗菌、調(diào)血脂、抗氧化、增強(qiáng)免疫、促進(jìn)胰腺分泌胰島素、調(diào)節(jié)人體糖代謝、降低血糖濃度、保持血糖恒定，對(duì)糖尿病具有一定的治療作用，且在民間一直有流傳用鮮馬齒莧治療糖尿病，療效顯著，但對(duì)鮮馬齒莧降血糖的物質(zhì)基礎(chǔ)卻并不明確。本課題從鮮、干馬齒莧降血糖藥效及相關(guān)成分差異出發(fā)，在組分結(jié)構(gòu)理論指導(dǎo)下，按由宏

2、觀到微觀的思路，逐步解析鮮馬齒莧降血糖物質(zhì)基礎(chǔ)，全文共分為4章：
　　第一章綜述了中藥鮮藥研究現(xiàn)狀，及鮮、干藥材在化學(xué)成分和藥理活性等方面差異；綜合了目前用于降血糖藥物活性篩選的體內(nèi)外模型；系統(tǒng)總結(jié)了國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道的馬齒莧藥材中化學(xué)成分和與降血糖相關(guān)的成分；最后提出在組分結(jié)構(gòu)理論的指導(dǎo)下，研究中藥鮮藥物質(zhì)基礎(chǔ)的思路與方法。
　　第二章初步探索馬齒莧鮮、干藥材整體降血糖作用差異
　　(1)建立胰島素抵抗細(xì)胞模型，考察胰島

3、素作用濃度和作用時(shí)間對(duì)HePG2細(xì)胞培養(yǎng)基中葡萄糖消耗量的影響，確定建立胰島素抵抗細(xì)胞模型的胰島素作用濃度為10-6mol/L，作用時(shí)間為24 h；
　　(2)比較鮮、干馬齒莧體外降血糖藥效差異，考察給胰島素抵抗HePG2細(xì)胞同等生藥量的鮮、干馬齒莧藥材提取物，HePG2細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基中葡萄糖消耗量的影響，結(jié)果表明，鮮、干馬齒莧提取物均具有明顯降血糖作用，且鮮馬齒莧降血糖效果優(yōu)于干品；
　　(3)在體驗(yàn)證鮮、干馬齒莧降血糖藥效

4、差異：用STZ為誘導(dǎo)劑，建立C57BL/6J小鼠糖尿病模型，考察給予小鼠不同劑量STZ溶液，比較不同劑量組小鼠一般狀態(tài)和血糖的變化，確定造模用STZ劑量為150mg/kg；再對(duì)STZ劑量為150mg/kg C57BL/6J糖尿病小鼠模型的驗(yàn)證：通過觀測(cè)給STZ后14天內(nèi)，小鼠一般狀態(tài)、血糖和胰島素的變化情況，結(jié)果顯示，14天內(nèi)各小鼠血糖明顯升高，且無死亡現(xiàn)象，故用STZ劑量為150mg/kg造模，模型穩(wěn)定、可靠；
　　(4)鮮、干

5、馬齒莧降血糖作用在體比較驗(yàn)證：通過比較給藥前后，糖尿病小鼠一般狀態(tài)的變化、血糖、糖耐量、胰島素、臟器指數(shù)、SOD、MDA等生化指標(biāo)的變化，結(jié)果表明，鮮、干馬齒莧提取物均具有明顯降血糖效果，且鮮馬齒莧降血糖效果明顯優(yōu)于干藥材，與體外細(xì)胞試驗(yàn)結(jié)果一致；
　　(5)鮮、干藥材化學(xué)成分差異比較研究：HPLC結(jié)果表明，鮮、干馬齒莧中化學(xué)成分不僅在含量上有差異，而且有些成分在種類上也有差異，結(jié)合藥效結(jié)果，鮮、干馬齒莧降血糖活性差異可能與鮮、干

6、藥材中的化學(xué)成分變化有關(guān)，原因可能是鮮藥在干制等加工處理過程中，破壞了鮮藥中原有的結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定的成分，使藥材內(nèi)部組分結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化，最終表現(xiàn)為藥效的差異，因此，本課題將進(jìn)一步對(duì)鮮藥內(nèi)部的組分結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析。
　　第三章研究鮮馬齒莧降血糖物質(zhì)基礎(chǔ)的組分構(gòu)成
　　(1)結(jié)合鮮、干馬齒莧化學(xué)成分差異和相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，以多酚類組分和生物堿組分為指標(biāo)，對(duì)鮮馬齒莧降血糖有效組分分離純化樹脂篩選、考察，確定鮮馬齒莧榨汁液有效組分群分離和純化的工

7、藝為：馬齒莧榨汁液總體上AB-8型大孔樹脂，水洗分離得馬齒莧粗多糖等大分子成分；70％乙醇洗脫，富集生物堿、多酚類等小分子成分；再將AB-870％乙醇洗脫部位凍干粉，上HP-20型大孔樹脂分別用蒸餾水、10％乙醇、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇和95％乙醇洗脫，分離得不同溶劑洗脫部位；
　　(2)體外建立胰島素抵抗細(xì)胞模型，對(duì)不同溶劑洗脫部位藥效篩選，結(jié)果表明：鮮馬齒莧降血糖主要有效部位為AB－8水洗部位、HP－20水洗部位、

8、HP－2010％乙醇洗脫部位、HP－2030％乙醇洗脫部位、HP-2095％乙醇洗脫部位；各溶劑部位經(jīng)紫外分光光度計(jì)測(cè)定總含量和HPLC分析鑒定，結(jié)果表明，AB-8水洗部位主要富集的是鮮馬齒莧粗多糖等大分子成分；HP－20水洗部位主要為鮮馬齒莧生物堿組分；合并HP－2010％、30％和95%乙醇洗脫部位得鮮馬齒莧多酚類組分，且多糖組分：多酚類組分：生物堿組分含量比例為7.51:6.81:6.02；
　　(3)將鮮馬齒莧多糖組分、生

9、物堿組分和多酚類組分和鮮馬齒莧中過大孔樹脂后剩余的其它組分及以上三個(gè)組分配伍，和鮮馬齒莧榨汁液總體，經(jīng)體外細(xì)胞藥效比較，發(fā)現(xiàn)鮮馬齒莧降血糖有效組分為鮮馬齒莧多糖組分、生物堿組分和多酚類組分，且這三個(gè)組分配伍以后給藥比單個(gè)組分藥效好，總體給藥降血糖效果最佳；
　　(4)各組分及配伍體內(nèi)降血糖藥效驗(yàn)證：建立C57 BL/6J小鼠糖尿病模型，對(duì)以上不同組分及配伍藥效研究，結(jié)果表明，鮮馬齒莧降血糖有效組分為鮮馬齒莧多糖組分、生物堿組分和多

10、酚類組分，且這三個(gè)組分配伍以后給藥比單個(gè)組分藥效好，且總體給藥降血糖效果最佳，這一結(jié)果與體外細(xì)胞試驗(yàn)結(jié)果一致。
　　第四章解析鮮馬齒莧降血糖物質(zhì)基礎(chǔ)的組分內(nèi)部結(jié)構(gòu)
　　(1)對(duì)鮮馬齒莧多糖組分分離、純化、解析：考察脫色、脫蛋白工藝，除去蛋白、色素等雜質(zhì)，然后透析除去無機(jī)鹽等小分子物質(zhì)，最后上DEAE纖維素柱，分離純化得5個(gè)組分的均一多糖POP1、POP2、POP3、POP4、POP5，其含量比為POP1：POP2：POP3：

11、POP4：POP5=1.28:4.71:5.92:3.79:1.05；對(duì)各均一多糖的分子量測(cè)定采用高效凝膠滲透色譜法，測(cè)得5個(gè)均一多糖的分子量分別為：60255.95861D、98176.734D、252829.8442D、636795.5209D、967218.1759D；用硫酸對(duì)各均一多糖進(jìn)行完全酸水解，水解產(chǎn)物用氣相色譜(GC)分析其單糖組成，試驗(yàn)結(jié)果5個(gè)均一多糖的單糖組成和比例為：POP1中含有鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、

12、半乳糖，其摩爾比為14:52.88:6.8:2.5:100.4；多糖POP2中含有鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖，其摩爾比為30.1:79.9:99.5；多糖POP3中含有鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖，其摩爾比為82.3:68.6:4.9:139.9；多糖POP4中含有鼠李糖、葡萄糖、半乳糖，其摩爾比為64.6:3.7:115.1；多糖POP5中含有鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖，其摩爾比為21.1:37.3:2.5:46；
　　

13、(2)生物堿類組分分析，以去甲腎上腺素和多巴胺為指標(biāo)，對(duì)鮮馬齒莧生物堿類組分內(nèi)部結(jié)構(gòu)解析，結(jié)果表明，鮮馬齒莧生物堿組分中去甲腎上腺素和多巴胺的含量比例為：16.7:7.38；
　　(3)多酚類組分分析，以咖啡酸、阿魏酸、橙皮苷、槲皮素、木犀草素為指標(biāo)，對(duì)鮮馬齒莧多酚類組分內(nèi)部結(jié)構(gòu)解析，結(jié)果表明，鮮馬齒莧多酚類組分中咖啡酸、阿魏酸、橙皮苷、槲皮素、木犀草素的含量比例為：9.67:17.6:3.37:26.7:23.5；
　　(

14、4)鮮馬齒莧降血糖藥效物質(zhì)基礎(chǔ)內(nèi)部結(jié)構(gòu)為：鮮馬齒莧多糖類組分、生物堿類組分、多酚類組分；且多糖類組分：生物堿類組分：多酚類組分＝51.18:28.61:10.50；
　　鮮馬齒莧多糖內(nèi)部的各均一多糖POP1、POP2、POP3、POP4、POP5的含量比例為POP1：POP2：POP3：POP4：POP5=1.28:4.71:5.92:3.79:1.05；
　　各均一多糖內(nèi)部單糖組成和比例為：多糖POP1中含鼠李糖：阿拉伯糖

15、：甘露糖：葡萄糖：半乳糖=14:52.88:6.8:2.5:100.4；多糖POP2中含鼠李糖：阿拉伯糖：半乳糖=30.1:79.9:99.5；多糖POP3中含鼠李糖：阿拉伯糖：葡萄糖：半乳糖=82.3:68.6:4.9:139.9；多糖POP4中含鼠李糖：葡萄糖：半乳糖=64.6:3.7:115.1；多糖POP5中含鼠李糖：阿拉伯糖：葡萄糖：半乳糖=21.1:37.3:2.5:46；
　　生物堿內(nèi)部去甲腎上腺素：多巴胺＝16.7