治療小鼠EAE模型的血吸蟲卵抗原有效成分的初步探尋及其驗證.pdf

1、目的： 1、用髓鞘蛋白脂質(zhì)蛋白多肽PLPl39-151作為抗原來誘發(fā)制作具有慢性緩解復(fù)發(fā)性特點的實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)小鼠模型。 2、利用日本血吸蟲蟲卵抗原(SEA)來干預(yù)髓鞘蛋白脂質(zhì)蛋白多肽PLPl39-151誘發(fā)的實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)小鼠模型，探討寄生蟲感染與EAE的關(guān)系。3、利用凝膠過濾色譜等手段，對SEA其中含有的蛋白按分子量進(jìn)行初步分離。 4、對分離后的蛋白分別干預(yù)EAE小鼠模

2、型，探討SEA中有效成分。 材料和方法： 1、應(yīng)用PLPl39-151抗原、福氏佐劑和結(jié)核桿菌腹部皮下注射雌性SJL／J小鼠，并且尾靜脈注射百日咳桿菌，誘發(fā)EAE小鼠動物模型，在免疫后觀察60天，每天進(jìn)行稱重和行為學(xué)評分。 2、制備EAE小鼠同時用血吸蟲蟲卵抗原干預(yù)小鼠，觀察每日小鼠的行為學(xué)評分及稱重。 3、用凝膠過濾色譜對SEA進(jìn)行過濾，并使用SDS-PAGE電泳觀察分離后的各部分蛋白特性。 4

3、、將分離后的各部分蛋白干預(yù)EAE小鼠，并觀察每日小鼠的行為學(xué)評分及稱重。 結(jié)果： 1、PLP139-15l免疫的14只小鼠中有13只在免疫后7-14天發(fā)病，平均發(fā)病時間為免疫后8．23+0．60天，高峰時平均得分為3．36±1．09分，發(fā)病動物主要表現(xiàn)為不活潑，進(jìn)食減少，抬頭無力，震顫，體重減輕，皮毛不光滑，并出現(xiàn)明顯的神經(jīng)系統(tǒng)體征，包括截癱、單癱、小腦癥狀和錐體外系癥狀，發(fā)病具有緩解．復(fù)發(fā)的特點。平均復(fù)發(fā)時間為免疫后2

4、7．30i2．57天，復(fù)發(fā)程度較第一次發(fā)作為輕。免疫后小鼠體重增加減少，28天內(nèi)增長體重為0．43~2．28克，而相對應(yīng)的正常小鼠體重增長達(dá)6．50-t0．93克(P<0．05)，而且EAE小鼠體重在發(fā)病前即出現(xiàn)減輕，具有波動性的特點。 2、日本血吸蟲蟲卵抗原干預(yù)EAE，發(fā)現(xiàn)小鼠14只，有13只在免疫后8．12天內(nèi)發(fā)病，平均發(fā)病時間為9．0~1．70天，發(fā)病動物主要表現(xiàn)為不活潑，進(jìn)食少，體重減輕，皮毛不光滑，多見尾巴下垂無力和雙

5、后肢癱，少數(shù)出現(xiàn)四肢癱或單肢癱。行為學(xué)評分發(fā)現(xiàn)，兩組小鼠在發(fā)病時間上及達(dá)到高峰的時間上無明顯差別，而在發(fā)病嚴(yán)重程度上，SEA干預(yù)組較EAE對照組減輕(P<0．05)。在病理學(xué)方面，兩組均出現(xiàn)炎性灶和脫髓鞘現(xiàn)象，但不論從病灶數(shù)和嚴(yán)重程度方面觀察，SEA處理組明顯較對照組減輕。 3、采用凝膠過濾色譜對SEA進(jìn)行初步分離，將其按分子量大小分為兩個部分，SDS-PAGE電泳證實兩部分所含蛋白分子量分別在10KI)以上和10KD以下。

6、 4、將分離后的蛋白分別對EAE小鼠進(jìn)行干預(yù)，并與SEA原液的干預(yù)效果進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)分子量在10KI)以上的部分與SEA的干預(yù)效果相差不大，而分子量在10KD以下的部分則效果不明顯。 結(jié)論： 1、以PLP139-151為抗原免疫SJL雌性小鼠誘發(fā)EAE，具有模型穩(wěn)定、發(fā)病率高和緩解復(fù)發(fā)的特點，并且發(fā)病多樣，病理改變具有炎性浸潤和脫髓鞘表現(xiàn)，可以用于多發(fā)性硬化的研究。 2、日本血吸蟲蟲卵抗原的干預(yù)能夠減輕EAE