Ad-ING4-IL-24雙基因共表達(dá)腺病毒對T24人膀胱癌細(xì)胞體內(nèi)抑癌效應(yīng)及分子機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討重組腺病毒介導(dǎo)的人ING4基因和人IL-24基因?qū)24人膀胱癌細(xì)胞裸鼠移植瘤的生長抑制作用及其分子機(jī)制。
　　 方法：（1）將已經(jīng)構(gòu)建好的Ad空載體腺病毒（Recombinant adenovirus-greenfluorescent protein，Ad-GFP）、Ad--ING4單基因重組腺病毒（Recombinantadenovirus-mediated hING4，Ad-ING4）、Ad-IL-24單基因重組

2、腺病毒（Recombinantadenovirus-mediated hIL24，Ad-IL-24）和Ad-ING4-IL-24雙基因重組腺病毒（Recombinant adenovirus-mediated hIL24 and hING4，Ad-ING4-IL-24）分別經(jīng)QBI-293A細(xì)胞感染多輪擴(kuò)增后獲得高效價(jià)重組病毒（2）將濃度為4×107個(gè)/ml的T24膀胱癌細(xì)胞懸液在裸鼠右前肢腋下皮下注射，建立T24人膀胱癌細(xì)胞裸鼠移植瘤

3、模型。（3）將35只荷瘤裸鼠隨機(jī)分為陰性對照組（PBS組）、空載體對照組（Ad-GFP組）、Ad-ING4單基因治療組、Ad-IL-24單基因治療組、Ad-ING4--IL-24雙基因治療組、MMC治療組和Ad-ING4-IL-24聯(lián)合MMC治療組，7組均使用瘤體內(nèi)注射干預(yù)用藥，隔日一次，共6次。觀測瘤體生長情況，測量腫瘤長徑和短徑，用公式：腫瘤體積=ab2/2（a為長徑，b為短徑）計(jì)算腫瘤體積，治療3周后將裸鼠脫頸處死，摘瘤稱重，用1

4、0％福爾馬林溶液固定標(biāo)本，石蠟包埋，進(jìn)行HE染色和免疫組織化學(xué)檢測，免疫組化法檢測瘤體細(xì)胞因子survivin、Fas、Cox-2、Bcl-2、caspase-3、VEGF、Bax、CD34的表達(dá)，并按Weidner的方法檢測微血管密度（micro-vessel density，MVD）。
　　 結(jié)果：（1）獲得了高滴度（109pfu/m1）的Ad-GFP、Ad-ING4、Ad-IL-24和Ad-ING4--IL-24。（2）成

5、功構(gòu)建T24人膀胱癌細(xì)胞裸鼠移植瘤，成瘤率達(dá)87.5％。（3）治療后Ad-IL24組、Ad-ING4組和Ad-ING4-IL-24組腫瘤重量分別為0.96±0.05g、0.93±0.06g、0.62±0.04g分別與PBS組（1.73±0.05）g及Ad-GFP組（1.69±0.06）g相比，有顯著差異（P<0.05），且Ad-ING4-IL-24雙基因組腫瘤重量比兩個(gè)單基組腫瘤重量明顯要輕（P<0.05），Ad-ING4-IL-24+

6、MMC組腫瘤重量（0.32-4±0.04）g比Ad-ING4-IL-24雙基因組（0.62±0.04）g和MMC單純化療組（0.56±0.04）g腫瘤重量明顯要輕（P<0.05）。Ad-IL24組、Ad-ING4組、Ad-ING4-IL-24組、MMC組和Ad-ING4-IL-24+MMC組瘤重抑瘤率分別為（43±6）％、（45±6）％，（63±5）％、（67±0.05）％和（82±0.07）％；Ad-ING4-IL-24雙基因組的抑瘤

7、率比兩單基因組的抑瘤率明顯增高（P<0.05）；Ad-ING4-IL-24+MMC組抑瘤率比Ad-ING4-IL-24雙基因組和MMC單純化療組的抑瘤率明顯增高（P<0.05）。（4）免疫組化顯示，Ad-IL-24組腫瘤組織中細(xì)胞凋亡相關(guān)因子Fas，Bax和caspase-3的表達(dá)明顯上調(diào)，Bcl-2與survivin的表達(dá)明顯下調(diào)，腫瘤血管形成相關(guān)因子VEGF和CD34的表達(dá)下調(diào)，MVD降低（P<0.05）；Ad-ING4腫瘤組織中細(xì)

8、胞凋亡相關(guān)因子Fas、Bax和caspase-3的表達(dá)明顯上調(diào)Bcl-2和survivin的表達(dá)明顯下調(diào)，腫瘤血管形成相關(guān)因子CD34和Cox-2的表達(dá)明顯下調(diào)，MVD降低（P<0.05）；Ad--ING4--IL-24組腫瘤組織中細(xì)胞凋亡相關(guān)因子Fas、Bax和caspase-3的表達(dá)明顯上調(diào)Bcl-2和survivin的表達(dá)明顯下調(diào)，腫瘤血管形成相關(guān)因子VEGF、Cox-2和CD34的表達(dá)明顯下調(diào)，MVD降低（P<0.05），且較A

9、d-ING4組和Ad-IL-24組改變更明顯，有顯著差異（P<0.05）。Ad-ING4-IL-24+MMC組腫瘤組織中細(xì)胞凋亡相關(guān)因子Fas，Bax和Caspase-3的表達(dá)明顯上調(diào)Bcl-2和Survivin的表達(dá)明顯下調(diào)，腫瘤血管形成相關(guān)因子VEGF、Cox-2和CD34下調(diào)，MVD降低（P<0.05），且較Ad-ING4--IL-24組和MMC組改變更明顯，有顯著差異（P<0.05）。
　　 結(jié)論：（1）Ad-IL24、

10、Ad--ING4、Ad--ING4-IL-24和Ad--ING4-1L-24聯(lián)合MMC均可以顯著抑制膀胱癌移植瘤生長。（2）Ad--ING4-IL-24雙基因抑瘤效果明顯優(yōu)于單基因，說明Ad--ING4-IL-24有抑癌增效的相加作用。（3）Ad4NG4--IL-24聯(lián)合MMC抑瘤效果明顯優(yōu)于Ad--ING4--IL-24雙基因和單純MMC化療，說明Ad-ING4-IL-24具有化療增敏相加作用，是MMC的理想化療增敏劑。（4）Ad-I