Ad-ING4-IL-24雙基因共表達(dá)對肺癌的抑癌增效和化療增敏的體外實驗研究.pdf

1、目的：研究腫瘤生長抑制因子4(ING4)和人白細(xì)胞介素24(IL-24)雙基因共表達(dá)腺病毒載體(pAd-ING4-polyA+promoter-IL-24)體外對肺癌細(xì)胞株NCI-H460的抑癌增效和化療增敏效應(yīng)及其分子機制。
　　 方法：采用本室已構(gòu)建的攜帶ING4／IL-24雙基因共表達(dá)的重組復(fù)制缺陷型腺病毒載體pAd-ING4-polyA+promoter-IL-24(簡稱Ad-ING4-IL-24)感染QBI-293A細(xì)

2、胞,并用該細(xì)胞進(jìn)行病毒擴增和效價測定。將Ad-ING4、Ad-IL-24、Ad-ING4-IL-24感染NCI-H460肺癌細(xì)胞后,運用RT-PCR及Western blot檢測ING4、IL-24基因在NCI-H460細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)；MTT法和FCM雙染法檢測PBS、Ad-GFP、Ad-ING4、Ad-IL-24、Ad-ING4-IL-24、DDP及Ad-ING4-IL-24聯(lián)合DDP體外抑制肺癌細(xì)胞NCI-H460生長和誘導(dǎo)凋亡

3、的抑癌增效和化療增敏效應(yīng)；流式細(xì)胞術(shù)PI單染法檢測Ad-ING4-IL-24等對NCI-H460細(xì)胞周期的影響；運用半定量RT-PCR檢測分析Ad-ING4-IL-24對NCI-H460細(xì)胞抑癌增效和化療增敏效應(yīng)可能的分子機制。Western blot檢測肺癌細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡執(zhí)行蛋白Caspase-3的表達(dá)。
　　 結(jié)果：Ad-ING4-IL-24可在QBI-293A細(xì)胞中增殖,48h后在倒置顯微鏡下可見細(xì)胞變圓,呈葡萄狀聚集,

4、倒置熒光顯微鏡下可見綠色熒光,呈現(xiàn)高感染效率。RT-PCR和Western blot檢測證實腺病毒介導(dǎo)的ING4和／或IL-24雙基因可以在NCI-H460細(xì)胞中穩(wěn)定轉(zhuǎn)錄及表達(dá)；Ad-ING4-IL-24體外不僅能明顯抑制NCI-H460肺癌細(xì)胞的生長,引起G2／M期阻滯和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,而且還顯著優(yōu)于Ad-ING4、Ad-IL-24單基因組(P<0.05),并呈現(xiàn)抑癌增效的疊加作用。Ad-ING4-IL-24能提高DDP化療藥物體外抑制

5、NCI-H460肺癌細(xì)胞的生長和誘導(dǎo)凋亡的作用,具有顯著的化療增敏效應(yīng)。分子機制檢測結(jié)果表明:Ad-ING4-IL-24能明顯上調(diào)NCI-H460肺癌細(xì)胞Bax、Caspase.3和下調(diào)Bcl-2、Survivin等細(xì)胞周期和凋亡相關(guān)基因的表達(dá)；且其效應(yīng)均較Ad-ING4、Ad-IL-24單基因更為顯著。
　　 結(jié)論：⑴腺病毒載體Ad-ING4-polyA+promoter-IL-24可以有效地介導(dǎo)外源性ING4和IL-24雙基

6、因在NCI-H460肺癌細(xì)胞中的表達(dá)。⑵Ad-ING4-IL-24雙基因共表達(dá)體外不僅能抑制NCI-H460肺癌細(xì)胞生長和誘導(dǎo)其凋亡而且顯著優(yōu)于Ad-ING4、Ad-IL-24單基因組(P<0.05),呈現(xiàn)明顯的抑癌增效作用。⑶Ad-ING4-IL-24雙基因共表達(dá)聯(lián)合化療藥物DDP體外呈現(xiàn)明顯的化療增敏效應(yīng),Ad-ING4-IL.24可成為肺癌的化療增敏劑。⑷腺病毒介導(dǎo)的ING4和IL-24雙基因共表達(dá)(Ad-ING4-IL-24)較