Ad-ING4-IRES-IL-24對(duì)肺癌細(xì)胞抑癌增效和化療增敏的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究ING4(腫瘤生長(zhǎng)抑制因子4)和hIL-24(人白細(xì)胞介素24)雙基因共表達(dá)腺病毒載體對(duì)A549肺腺癌細(xì)胞體外抑癌增效及化療增敏作用。 方法：采用本室已構(gòu)建的攜帶ING4/hIL-24雙基因共表達(dá)的重組復(fù)制缺陷型腺病毒載體(Ad-ING4-IRES-IL-24)感染QBI-293A細(xì)胞，并用該細(xì)胞進(jìn)行病毒擴(kuò)增和效價(jià)測(cè)定，用RT-PCR法鑒定ING4和IL-24基因轉(zhuǎn)錄。用50MOI的Ad-ING4-IRES-IL-24

2、作用于體外培養(yǎng)的人肺癌細(xì)胞A549和人胚肺成纖維細(xì)胞WI-38，用RT-PCR法鑒定目的基因的轉(zhuǎn)錄。用MTT法評(píng)價(jià)Ad-ING4-IRES-IL-24對(duì)兩種細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，繪制出細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)(FCM)和激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)檢測(cè)Ad-ING4-IRES-IL-24對(duì)A549細(xì)胞凋亡的影響。免疫細(xì)胞化學(xué)分析凋亡相關(guān)因子Bax，Bcl-2，Caspase3的變化，探討Ad-ING4-IRES-IL-24誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞

3、凋亡的主要機(jī)理。用Ad-ING4-IRES-IL-24聯(lián)合化療藥物順鉑(DDP)觀(guān)察其對(duì)肺癌細(xì)胞化療的增敏作用。MTT法檢測(cè)兩者聯(lián)合作用后對(duì)A549細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其凋亡率。激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)檢測(cè)Ad-ING4-IRES-IL-24聯(lián)合化療藥物順鉑(DDP)對(duì)A549細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果：Ad-ING4-IRES-IL-24可在QBI-293A細(xì)胞中增殖，48h后在倒置顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞變圓，呈葡

4、萄狀聚集，倒置熒光顯微鏡下可見(jiàn)綠色熒光，呈現(xiàn)高感染效率。RT-PCR檢測(cè)可見(jiàn)ING4和IL-24基因成功轉(zhuǎn)錄。病毒效價(jià)檢測(cè)為108pfu/ml。Ad-ING4-IRES-IL-24作用A549細(xì)胞和WI-38細(xì)胞后，RT-PCR結(jié)果顯示目的基因均可在上述兩種細(xì)胞中成功轉(zhuǎn)錄，并能顯著抑制A549細(xì)胞的生長(zhǎng)，并呈現(xiàn)時(shí)間依賴(lài)性和劑量依賴(lài)性，但對(duì)WI-38細(xì)胞無(wú)明顯抑制作用。Ad-ING4-IRES-IL-24感染A549細(xì)胞后，其雙基因表達(dá)對(duì)

5、A549細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡效應(yīng)明顯優(yōu)于單基因處理組，具抑癌增效功能，其凋亡機(jī)制與活化的Caspase3表達(dá)水平和Bax/Bcl-2比值升高有關(guān)。Ad-ING4-IRES-IL-24聯(lián)合順鉑(DDP)，對(duì)A549細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡率均明顯優(yōu)于雙基因組和單-DDP化療組，具有化療增敏作用。 結(jié)論：重組腺病毒Ad-ING4-IRES-IL-24具有抑制A549肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)和誘導(dǎo)凋亡的抑癌增效和化療增敏作用，可