Ad-ING4-P53聯(lián)合順鉑對(duì)下咽癌FADU抑瘤增效作用的體內(nèi)研究.pdf

1、目的：
　　下咽癌在耳鼻喉頭頸外科中，是較為常見的惡性腫瘤，約占0.8％-1.5%，因腫瘤細(xì)胞的分化水平不高，因而多以中、低分化鱗狀細(xì)胞癌為主，由于腫瘤生長位置較深，不容易被發(fā)現(xiàn)，初始表現(xiàn)不規(guī)范，約有50%病人第一次就診時(shí)就已經(jīng)有頸部淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移。當(dāng)今，下咽癌的治療主要是以手術(shù)加術(shù)后放化療為首選，但是下咽癌具有顯著的耐藥性和轉(zhuǎn)移特性，因此目前對(duì)下咽癌的預(yù)后很差?？v然最近幾年來對(duì)下咽癌的治療方法一直在改進(jìn)，其5年生存率依舊較低。我們

2、的實(shí)驗(yàn)通過檢測(cè)腺病毒（Ad）攜帶生長抑制因子4（ING4）和抑癌基因P53的雙基因共表達(dá)（Ad-ING4-P53）聯(lián)合順鉑(Cisplatin, DDP)對(duì)人下咽癌FADU細(xì)胞株移植瘤發(fā)生發(fā)展和凋亡的作用,初步研究Ad-ING4-P53對(duì)下咽癌細(xì)胞DDP化療敏感性的影響及其作用機(jī)制，探討Ad-ING4-P53作為潛在加強(qiáng)對(duì)于抗腫瘤化療藥物敏感性的基因治療載體的可行性。
　　方法：
　　培養(yǎng)QBI-293A細(xì)胞，進(jìn)行重組基因的

3、轉(zhuǎn)染，擴(kuò)增。在細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)下咽癌FADU細(xì)胞，建立裸鼠人下咽癌FADU細(xì)胞系移植瘤模型。腫瘤長出后達(dá)到一定體積時(shí)，任意5只分一組，分別給予干預(yù)，每次干預(yù)之前測(cè)量腫瘤體積，處死動(dòng)物后取出完整腫瘤組織并測(cè)其重量，最后按照腫瘤重量通過公式計(jì)算抑瘤率，觀察 Ad-ING4-P53、DDP對(duì)裸鼠人下咽癌FADU細(xì)胞移植瘤的抑瘤作用；應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)裸鼠移植瘤組織內(nèi)ING4、P53、Bax、Bcl-2的基因表達(dá)情況；用HE染色觀察腫瘤細(xì)胞

4、生長和凋亡情況以及藥物對(duì)肝腎細(xì)胞的毒性作用；通過TUNEL法觀察移植瘤細(xì)胞中早期凋亡的情況；應(yīng)用免疫組化檢測(cè)ING4、P53以及凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl-2在腫瘤組織細(xì)胞中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　通過用重組基因感染QBI-293A細(xì)胞，重組基因成功轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞，進(jìn)行擴(kuò)增。體內(nèi)瘤體生長曲線顯示：Ad-ING4-P53+ DDP對(duì)裸鼠人下咽癌FADU細(xì)胞移植瘤具有非常顯著的抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用，并且優(yōu)于單獨(dú)DDP化療和

5、單獨(dú)Ad-ING4-P53治療（P<0.05）,并且兩者具有抑瘤增效的協(xié)同作用（Q=1.19）。RT-PCR和免疫組化結(jié)果顯示：Ad-ING4-P53聯(lián)合DDP能顯著上調(diào)裸鼠人下咽癌細(xì)胞FADU移植瘤內(nèi)ING4、P53、Bax并下調(diào)Bcl-2的表達(dá)，且較單獨(dú)DDP組和單獨(dú)Ad-ING4-P53組作用更加顯著（P<0.05）。HE染色和TUNEL結(jié)果顯示：Ad-ING4-P53聯(lián)合DDP對(duì)裸鼠人下咽癌FADU移植瘤具有明顯的促凋亡作用，且

6、較單獨(dú)組更加明顯（P<0.05）。HE染色結(jié)果顯示：Ad-GFP組、單獨(dú)Ad-ING4-P53組和Ad-ING4-P53聯(lián)合DDP組對(duì)裸鼠肝臟有明顯毒性作用，對(duì)腎臟無明顯毒性作用。
　　結(jié)論：
　　1． Ad-ING4-P53能增強(qiáng)順鉑對(duì)下咽癌FADU細(xì)胞移植瘤的殺傷作用。
　　2． Ad-ING4-P53聯(lián)合順鉑能誘導(dǎo)下咽癌FADU細(xì)胞移植瘤。凋亡可能與啟動(dòng)關(guān)鍵凋亡蛋白Bax并抑制Bcl-2有關(guān)。
　　3． A