建立檢測(cè)鼠胸腺細(xì)胞、海馬神經(jīng)元DNA損傷的方法及其部分應(yīng)用.pdf

1、目的：建立檢測(cè)小鼠胸腺細(xì)胞DNA損傷的方法，并應(yīng)用此方法探討苯、苯并(a)芘引起小鼠胸腺細(xì)胞DNA損傷及其機(jī)制。 方法：運(yùn)用堿性單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)(SCGE)建立檢測(cè)鼠胸腺細(xì)胞DNA損傷的方法，并在此基礎(chǔ)上將苯、苯并(a)芘分為三個(gè)濃度組，在加或不加代謝活化系統(tǒng)(S9Mix)條件下，測(cè)定鼠胸腺細(xì)胞DNA的彗星尾長(zhǎng)；采用比色法測(cè)定不同濃度苯和苯并(a)芘染毒后鼠胸腺細(xì)胞NO含量；并在反應(yīng)體系中加入抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸，觀察鼠胸

2、腺細(xì)胞DNA的彗星尾長(zhǎng)的變化。 結(jié)果：1.當(dāng)有S9Mix存在條件下，10-6mol/L-10-4mol/L濃度的苯可使彗星拖尾長(zhǎng)度明顯增加，且呈濃度依賴性。不加S9Mix條件下，10-6mol/LB(a)P濃度組中鼠胸腺細(xì)胞DNA彗星拖尾長(zhǎng)度與溶劑對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性(P＞0.05)；10-4mol/L、10-5mol/L濃度組鼠胸腺細(xì)胞DNA彗星拖尾長(zhǎng)度與溶劑對(duì)照組比較差異有顯著性(P＜0.05)；加S9Mix條件下，10-

3、6mol/L-10-4mol/LB(a)P濃度組鼠胸腺細(xì)胞DNA彗星拖尾長(zhǎng)度與溶劑對(duì)照組和S9Mix對(duì)照組相比較，差異均有顯著性(P＜0.01)，且成劑量—效應(yīng)關(guān)系。 2.在加或不加S9Mix的條件下，10-6mol/L-10-4mol/L濃度的苯對(duì)鼠胸腺細(xì)胞所產(chǎn)生的NO濃度與溶劑對(duì)照比較差異無(wú)顯著性；10-6mol/L-10-4mol/L濃度的B(a)P對(duì)鼠胸腺細(xì)胞所產(chǎn)生的NO濃度在各組間比較差異無(wú)顯著性，而加S9Mix與不加

4、S9Mix兩組之間比較差異有顯著性(P＜0.05)。 3.加入抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine，NAC)后，在有S9Mix反應(yīng)體系中，0.1μmol/L-1.0μmol/L濃度的NAC組與溶劑對(duì)照組比較，彗星拖尾長(zhǎng)度明顯縮短，且成劑量—效應(yīng)關(guān)系。 結(jié)論：1.苯和苯并(a)芘均能引起鼠胸腺細(xì)胞DNA損傷。 2.NO可能不參與苯和苯并(a)芘引起的鼠胸腺細(xì)胞DNA損傷作用。 3.NA