腫瘤相關(guān)抗原CD98的單克隆抗體制備及其功能研究.pdf

1、惡性腫瘤是世界范圍內(nèi)主要致死性疾病之一。傳統(tǒng)治療手段在臨床上無(wú)法根治惡性腫瘤且伴有毒副作用。近幾十年來(lái)，通過(guò)對(duì)腫瘤分子機(jī)制不斷的深入研究，針對(duì)癌癥的發(fā)生中起關(guān)鍵作用的靶分子及其調(diào)控的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的特異性分子的靶向治療，引發(fā)抗癌治療理念的變革。分子靶向治療作為腫瘤治療的新策略，因具有特異性、選擇性強(qiáng)，副作用小等治療優(yōu)勢(shì)，逐漸被應(yīng)用并在臨床取得了成功。精準(zhǔn)靶點(diǎn)的確定是分子靶向治療策略的關(guān)鍵，也是研究攻克腫瘤的主要難點(diǎn)。目前已有多種單克隆抗體

2、作為腫瘤分子靶向藥物進(jìn)入臨床或市場(chǎng)，結(jié)果顯示該類大分子靶向藥物具有較好的反應(yīng)療效，同時(shí)具有較輕甚至沒有藥物的不良反應(yīng)。
　　腫瘤相關(guān)分子（Tumor associated molecule，TAM）CD98是近年來(lái)報(bào)道較多的跨膜糖蛋白分子。研究顯示，CD98分子在不同種類的惡性腫瘤中呈現(xiàn)異常表達(dá)，并且參與腫瘤發(fā)生，增殖以及代謝等多種生物學(xué)事件，而通過(guò)干涉、敲除、阻斷等方式抑制CD98的異常表達(dá)后，可以腫瘤的惡性表型有所好轉(zhuǎn)。本研究

3、旨在基于人源轉(zhuǎn)基因小鼠篩選出靶向人CD98（CD98hc,SLC3A2）的人源單抗，對(duì)其親和力、特異性級(jí)進(jìn)行鑒定并對(duì)單抗的抗腫瘤功能進(jìn)行探索。
　　本課題主要包括以下三部分工作：
　　第一部分，CD98分子作為抗體靶向治療靶點(diǎn)的確定。
　　我們通過(guò)十種發(fā)病率和致死率較高腫瘤的組織芯片，713例腫瘤組織樣本和260例癌旁或正常組織樣本，經(jīng)免疫組織化學(xué)及免疫熒光實(shí)驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果提示：CD98是一種腫瘤相關(guān)的生物標(biāo)志（B

4、iomaker）。此外，通過(guò)100對(duì)結(jié)腸癌及癌旁組織預(yù)后分析，CD98的高表達(dá)與結(jié)腸癌不良預(yù)后有關(guān)，可作為一個(gè)獨(dú)立預(yù)后因素。
　　第二部分，人源抗體轉(zhuǎn)基因小鼠篩選靶向CD98全人源抗體。
　　首先，我們構(gòu)建了CD98抗原的原核系統(tǒng)表達(dá)，之后用轉(zhuǎn)人抗體基因小鼠篩選獲得靶向CD98全人源抗體的細(xì)胞系，具體方法是：通過(guò)全人抗體轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行目標(biāo)抗原CD98的免疫并進(jìn)行雜交瘤篩選和制備穩(wěn)定的單克隆抗體高表達(dá)細(xì)胞株。通過(guò)此方法我們獲得

5、了四株表達(dá)靶向CD98人源抗體的細(xì)胞株。
　　第三部分，對(duì)所獲得的靶向CD98人源抗體的鑒定及其抑瘤作用及功能機(jī)制。
　　這一部分研究中，我們用ELISA間接法，Western Blot,免疫組織化學(xué)等試驗(yàn)對(duì)表達(dá)抗CD98的人源抗體CD98-1，CD98-2，CD98-3，CD98-4的親和力及特異性鑒定，結(jié)果顯示這四株抗體能和細(xì)胞及組織中表達(dá)的 CD98特異結(jié)合且親和力較好；所制備的抗體均能與原核表達(dá)的 CD98相互作用。