轉(zhuǎn)膠蛋白抑制ARA54增強(qiáng)的雄激素受體轉(zhuǎn)錄功能和前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng).pdf

1、背景與目的 前列腺癌是嚴(yán)重危害男性健康的常見(jiàn)疾病.雄激素及其受體的功能在前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用.聯(lián)合雄激素阻斷是目前治療晚期前列腺癌的主要手段.在治療后雄激素受體在癌組織內(nèi)仍然持續(xù)表達(dá),前列腺癌最終向雄激素非依賴(lài)型轉(zhuǎn)變.研究雄激素受體在前列腺細(xì)胞內(nèi)信號(hào)調(diào)控的分子機(jī)理及其在腫瘤進(jìn)展中所起的作用對(duì)我們認(rèn)識(shí)和治療前列腺癌將產(chǎn)生重要影響. 雄激素的生理作用是通過(guò)雄激素受體而介導(dǎo)的.雄激素受體的轉(zhuǎn)錄功能需要共調(diào)節(jié)因子的

2、參與.目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了多種雄激素受體的相關(guān)蛋白和共調(diào)節(jié)因子.它們?cè)谇傲邢侔┌l(fā)展中的病理生理功能正在得到闡明.ARA54是雄激素受體重要的共調(diào)節(jié)因子.它能夠激活雄激素受體的轉(zhuǎn)錄功能.ARA54也可以與其他雄激素受體共調(diào)節(jié)因子如SRC-1或ARA70產(chǎn)生協(xié)同作用,共同激活雄激素受體. 雄激素受體轉(zhuǎn)錄功能的調(diào)控機(jī)理目前還未完全闡明.尚不清楚雄激素受體的共調(diào)節(jié)因子本身是否需要相關(guān)蛋白的進(jìn)一步協(xié)助和調(diào)控.本研究意在探索雄激素受體共調(diào)節(jié)因子A

3、RA54的相關(guān)蛋白及其對(duì)雄激素受體信號(hào)通路和前列腺癌進(jìn)展所起的影響. 材料與方法 本研究采用CLONTECH酵母雙雜交系統(tǒng),以全長(zhǎng)ARA54為誘餌從人類(lèi)前列腺cDNA文庫(kù)中篩選出轉(zhuǎn)膠蛋白.克隆其全長(zhǎng)cDNA后我們利用哺乳類(lèi)雙雜交、體外GST沉淀和免疫共沉淀再次驗(yàn)證了它與ARA54的相互作用.通過(guò)報(bào)告基因檢測(cè)和siRNA沉默技術(shù)我們研究了轉(zhuǎn)膠蛋白對(duì)ARA54及雄激素受體信號(hào)通路的影響.采用哺乳類(lèi)雙雜交和免疫熒光染色我們進(jìn)一

4、步探討了轉(zhuǎn)膠蛋白抑制雄激素受體轉(zhuǎn)錄功能的分子機(jī)理.利用基因轉(zhuǎn)染和siRNA沉默技術(shù)我們研究了轉(zhuǎn)膠蛋白對(duì)前列腺癌細(xì)胞株LNCaP生長(zhǎng)以及前列腺特異性抗原表達(dá)的影響.最后我們采用免疫組化和組織芯片技術(shù)檢測(cè)了正常和癌變前列腺組織內(nèi)轉(zhuǎn)膠蛋白的表達(dá)水平. 結(jié)果 我們的研究從人類(lèi)前列腺 cDNA 文庫(kù)中篩選出雄激素受體共調(diào)節(jié)因子ARA54的負(fù)調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白一轉(zhuǎn)膠蛋白(transgelin).轉(zhuǎn)膠蛋白可以抑制由 ARA54增強(qiáng)的雄激素受

5、體轉(zhuǎn)錄功能.轉(zhuǎn)膠蛋白抑制雄激素受體轉(zhuǎn)錄功能必須通過(guò) ARA54的介導(dǎo).轉(zhuǎn)膠蛋白阻止 ARA54 二聚體的形成并阻斷了雄激素受體與ARA54的結(jié)合,最終導(dǎo)致雄激素受體在胞漿內(nèi)的滯留.前列腺癌細(xì)胞株 LNCaP 轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)膠蛋白后其前列腺特異性抗原表達(dá)和細(xì)胞生長(zhǎng)均受抑制.由 siRNA 抑制內(nèi)源性轉(zhuǎn)膠蛋白表達(dá)則促進(jìn)了LNCaP細(xì)胞生長(zhǎng)及前列腺特異性抗原表達(dá).人前列腺癌組織內(nèi)轉(zhuǎn)膠蛋白表達(dá)水平的降低進(jìn)一步提示了它的腫瘤抑制功能. 結(jié)論

6、 1. 轉(zhuǎn)膠蛋白是ARA54相關(guān)的雄激素受體二級(jí)調(diào)控因子.2. 轉(zhuǎn)膠蛋白阻止 ARA54 二聚體的形成并阻斷了雄激素受體與ARA54的結(jié)合,最終導(dǎo)致雄激素受體在胞漿內(nèi)的滯留.3. 轉(zhuǎn)膠蛋白抑制由ARA54增強(qiáng)的雄激素受體轉(zhuǎn)錄功能和前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng).4. 人類(lèi)前列腺癌組織中轉(zhuǎn)膠蛋白表達(dá)水平顯著低于正常前列腺組織.5. 人類(lèi)前列腺癌組織中ARA54表達(dá)水平顯著高于正常前列腺組織.6. ARA54具有直接正向調(diào)控雄激素受體和間接介導(dǎo)轉(zhuǎn)膠蛋