湖南地區(qū)2型糖尿病視網(wǎng)膜病變易感性因素初步研究.pdf

1、目的:
　　研究湖南地區(qū)2型糖尿病視網(wǎng)膜病變(diatetic retinopathy，DR)遺傳及環(huán)境易感因素;篩選糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生的高危人群。
　　(1)采用薈萃分析方法，搜尋黃種人中與糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生相關(guān)的血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growthfactor, VEGF)單核苷酸多態(tài)性位點。
　　(2)探討湖南地區(qū)人群中VEGF單核苷酸多態(tài)性位點與糖尿病視網(wǎng)膜病變易感性的關(guān)

2、聯(lián)性。
　　(3)探討血清中VEGF蛋白總量，亞型VEGF165及其異構(gòu)體VEGF165b含量與糖尿病視網(wǎng)膜病變的相關(guān)性。
　　(4)采用病例對照及l(fā)ogistic回歸分析比較VEGF單核苷酸多態(tài)性位點、VEGF蛋白及其他人口學特征和生化指標，探討糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生的高危因素。
　　方法:
　　(1)回顧2012年3月前有關(guān)VEGF單核苷酸多態(tài)性與糖尿病視網(wǎng)膜病變的所有英文文獻。系統(tǒng)性檢索及獲取原始文獻、制定納

3、入及排除標準;將單核苷酸多態(tài)性位點與糖尿病視網(wǎng)膜病變相關(guān)的實驗數(shù)據(jù)進行薈萃分析。
　　(2)根據(jù)薈萃分析顯示黃種人中有意義的VEGF單核苷酸多態(tài)性位點，采用病例對照方法，使用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(PCR-RFLR)檢測其在湖南地區(qū)正常人、糖尿病無視網(wǎng)膜病變患者(diabetic without retinopathy，DWR)、糖尿病視網(wǎng)膜病變患者(diabeticretinopathy，DR)的分布，通過卡方檢驗統(tǒng)計

4、分析其在各組間的分布差異。
　　(3)采用病例對照方式，使用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測湖南地區(qū)正常人，糖尿病無視網(wǎng)膜病變患者，糖尿病視網(wǎng)膜病變患者的血清中VEGF總量，亞型VEGF165及其異構(gòu)體VEGF165b含量，通過成組T檢驗及線性回歸分析統(tǒng)計分析其含量在各組間的分布差異，及與VEGF單核苷酸多態(tài)性位點及環(huán)境因素間的關(guān)聯(lián)性。
　　(4)采用病例對照方式，統(tǒng)計糖尿病無視網(wǎng)膜病變患者，糖尿病視網(wǎng)膜病變患者的人口學特征及生化指標

5、的相關(guān)數(shù)據(jù)及VEGF單核苷酸多態(tài)性位點及VEGF蛋白表達，進行成組T檢驗及l(fā)ogistic回歸分析，探討糖尿病視網(wǎng)膜病發(fā)生的高危易感因素。
　　結(jié)果:
　　(1)薈萃分析結(jié)果:
　　VEGF rs699947共顯性模型-雜合型/野生型(CAVs CC)與DR發(fā)病風險存在相關(guān)性(I2=64％，OR=1.2795％CI[1.05，1.54]，P=0.02)，尤其在黃色人種中(I2=38％，OR=1.4695％CI[1.17

6、，1.82]，P=0.0007)。其它模型與DR發(fā)病無顯著相關(guān)性(P＞0.05)
　　VEGF rs1570360各模型在各色人種中與DR的發(fā)病無顯著相關(guān)性(P＞0.05)。
　　VEGF rs2010963亞組分析:黃色人種組隱性模型(CC VsGC+GG)顯示與DR的發(fā)病相關(guān)（I2=60％，OR=1.2895％ CI[1.01，1.63]，P=0.04); PCR-RFLR測序方式組隱性模型(CC VsGC+GG)與DR

7、的發(fā)生明顯相關(guān)(I2=46％，OR=1.5095％CI[1.05，2.14]，P=0.03)
　　VEGF rs3025039共顯性模型-純和型/野生型(TT Vs CC)與DR發(fā)病風險存在相關(guān)性(I2=50％，OR=2.4795％CI[1.11，5.51]，P=0.03)，特別是在黃色人種中(I2=51％，OR=3.5395％CI[1.35，9.26]，P=0.01)。隱性模型(TT Vs CT+CC)白色人種與DR發(fā)病無明顯相

8、關(guān)性(P=0.05)，在黃色人種中示與DR的發(fā)生相關(guān)(I2=33％，OR=3.1995％CI[1.21，8.42]，P=0.01);其它各模型與DR的發(fā)病無明顯相關(guān)性(P＞0.05)。
　　(2)本省人群中DWR組與DR組VEGF基因多態(tài)性位點基因型頻率及等位基因頻率:
　　VEGF基因rs699947位點:DR組AA基因型分布頻率為14.8％，DWR組為4.3％; CC基因型DR組為48.1％，DWR組為60.9％(P=0

9、.04，＜0.05)，其等位基因A頻率在DR組為33.3％，DWR組為21.7％(P=0.016，＜0.05)。攜帶rs699947AA基因型的糖尿病患者發(fā)生DR的危險性較rs699947CC基因型及CA基因型攜帶者高3.83倍(OR=3.83)。
　　VEGF基因rs833061位點:DR組CC基因型分布頻率為16.0％，DWR組為4.3％; TT基因型DR組為45.7％，DWR組為58.7％(P=0.025，＜0.05)，其等

10、位基因C頻率在DR組為35.2％，DWR組為22.8％(P=0.011，＜0.05)。攜帶rs833061CC基因型的糖尿病患者發(fā)生DR的危險性較rs833061TT基因型及TC基因型攜帶者高4.21倍(OR=4.21)。
　　VEGF基因rs13207351位點:基因型頻率及等位基因頻率在研究組和對照組間的差異無明顯統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。攜帶rs13207351GG基因型、GA基因型及AA基因型的糖尿病患者發(fā)生DR的危險性

11、沒有明顯差別。
　　VEGF基因rs2010963位點:DR組CC基因型分布頻率為21.0％，DWR組為9.8％。GG基因型DR組為28.4％，DWR組為42.4％(P=0.049，＜0.05)，其等位基因C頻率在DR組為46.3％，DWR組為33.4％(P=0.017，＜0.05)。攜帶rs2010963CC基因型的糖尿病患者發(fā)生DR的危險性較rs2010963GG基因型及GC基因型攜帶者高2.45倍(OR=2.45)。

12、　　VEGF基因rs3025039位點:基因型頻率及等位基因頻率在研究組和對照組間的差異無明顯統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。攜帶rs3025039CC基因型、CT基因型及TT基因型的糖尿病患者發(fā)生DR的概率沒有明顯統(tǒng)計差異。
　　(3) VEGF蛋白總量、VEGF165含量和VEGF165b含量:
　　1)正常對照組中血清VEGF總量為44.47±3.42（pg/ml），DWR組血清VEGF總量為57.74±11.23(pg/

13、ml)，DR組59.25±11.62(pg/ml)。DWR組及DR組的VEGF總量都較正常對照組升高(P＜0.05)，但DWR組與DR組之間VEGF總量沒有明顯的統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　2)正常對照組中VEGF165含量為15.89±1.31(pg/ml)，DWR組為22.68±4.52(pg/ml);DR組為27.43±7.29(pg/ml)，與正常對照組比具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);且VEGF165在DWR組及D

14、R組之間也有顯著差異(P=0.025)。
　　3) VEGF1651b在血中的含量在正常對照組為9.25±0.82(pg/ml);DWR組為6.97±1.46(pg/ml); DR組為5.43±2.35(pg/ml)。其含量在三組之間呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。VEGF165及VEGF165b的比值在三組間出現(xiàn)變化，比值逐漸增大(1.72、3.25、5.05)。
　　4)蛋白總量與基因位點:攜帶r

15、s2010963CC基因型人群其血中VEGF蛋白含量較GG基因型及GA型顯著增高（CC基因型VEGF蛋白含量為62.59±13.71（pg/ml），GA基因型蛋白含量為53.27±10.37(pg/ml)，GG基因型蛋白含量為50.85±10.59(pg/ml)); CC基因型與GG基因型及GC基因型比較均具有統(tǒng)計學上的顯著性差異，P＜0.05），其他各SNP位點各基因型之間無明顯統(tǒng)計學差別(P＞0.05)。
　　(4)糖尿病視網(wǎng)

16、膜病變易感因素分析:
　　1) DWR組及DR組之間的人口學特征及生化指標的相關(guān)數(shù)據(jù)進行成組T檢驗，發(fā)現(xiàn)收縮壓、舒張壓、糖化血紅蛋白及肌酐值在兩組之間存在顯著的統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　2) logistic回歸分析:收縮壓高于160mmHg的糖尿病患者發(fā)生DR的危險性較低于130mmHg的高7.5倍，舒張壓高于90mmHg的糖尿病患者發(fā)生DR的危險性較低于90mmHg的高2倍。HbAIC含量高于14.0％的糖尿病患

17、者發(fā)生DR的危險性較低于8.0％的高11.50倍。肌酐值高于100mmol/L的糖尿病患者發(fā)生DR的危險性較低于60mmol/L的高出5.5倍。攜帶rs2010963CC基因型糖尿病患者發(fā)生DR的危險性較GG基因型患者高3.2倍。VEGF165含量高于28.0mmol/L的糖尿病患者發(fā)生DR的危險性較低于28.0mmol/L的患者高9.3倍，而VEGF165b含量高于5.0mmol/L的糖尿病患者發(fā)生DR的危險性較低于5.0mmol/L

18、的患者明顯降低(OR=0.013)，VEGF165b對于糖尿病患者有明顯保護作用。
　　結(jié)論:
　　(1)黃色人種中VEGF rs699947的共顯性模型(CA VsCC)、VEGF rs2010963隱性模型(CC Vs GC+GG)及VEGF rs3025039的共顯性模型(TT Vs CC)、隱性模型(TT Vs CT+CC)跟糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生相關(guān);而在白色人種中上述多態(tài)性位點與糖尿病視網(wǎng)膜病變無明顯相關(guān)性。

19、r>　　(2)本省人群VEGF基因rs699947位點、VEGF基因rs833061位點、VEGF基因rs2010963位點的多態(tài)性變化在糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生發(fā)展中具有一定的意義
　　(3)VEGFxxx與VEGFxxxb比值改變導致糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生和發(fā)展。rs2010963位點多態(tài)性變化為功能性改變，對糖尿病患者發(fā)生糖尿病視網(wǎng)膜病變有重要意義。
　　(4)收縮壓≥160mmHg、舒張壓≥90mmHg、糖化血紅蛋白≥8