利用多重單堿基引物延伸法檢測耳聾基因熱點突變.pdf

1、背景:聽覺系統(tǒng)中外耳、中耳、內(nèi)耳結(jié)構(gòu)異常及聽覺傳導(dǎo)信號通路中的聽神經(jīng)和各級中樞發(fā)生病變，導(dǎo)致聽功能障礙，表現(xiàn)出不同程度的聽力下降，統(tǒng)稱為耳聾。我國聽力殘疾人數(shù)眾多，每年有3萬左右聾兒出生，發(fā)病率為1/500～1/1000。60％的耳聾患者是遺傳因素所導(dǎo)致的，遺傳性聾中非綜合征型耳聾占70％，30％為綜合征型耳聾。迄今已經(jīng)定位的非綜合征型耳聾基因座約有136個，已克隆基因88個。雖然耳聾具有較高的遺傳異質(zhì)性，但大部分非綜合征型耳聾由少數(shù)幾

2、個基因熱點突變引起，包括GJB2、GJB3、SLC26A4、線粒體基因(mtDNA12SrRNA)等，這使遺傳性耳聾的基因診斷和篩查成為可能。傳統(tǒng)的耳聾基因檢測方法包括限制性片段長度多態(tài)性分析、限制性內(nèi)切酶酶切指紋-單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析、變性高效液相色譜法、實時熒光定量Taqman MGB探針法、PCR結(jié)合Sanger測序、高分辨率熔解曲線法等。但是這些方法很難同時對不同基因上的多個突變位點進(jìn)行檢測。基因芯片技術(shù)雖然能同時對多基因、多位點

3、進(jìn)行檢測，但是成本昂貴，對技術(shù)要求高。因此，建立一種能一次性檢測多個熱點突變、可靠、經(jīng)濟、快速的技術(shù)尤為重要。
　　目的:采用多重單堿基引物延伸法對耳聾先證者進(jìn)行GJB2、GJB3、SLC26A4、12SrRNA基因12個熱點突變位點的一次性檢測，以期建立一種快速、可靠、經(jīng)濟的耳聾基因診斷方法。
　　方法:采用多重單堿基引物延伸法對96名非綜合征型耳聾先證者、66名家系成員及50名正常人，共212名，進(jìn)行GJB2、GJB3、

4、SLC26A4、12SrRNA基因12個熱點突變位點的一次性檢測，并采用Sanger測序進(jìn)行驗證。
　　結(jié)果:1、采用多重單堿基引物延伸法對96名非綜合征型耳聾先證者、66名家系成員及50名正常人，共212名，進(jìn)行GJB2、GJB3、SLC26A4、12SrRNA基因12個熱點突變位點的一次性檢測，結(jié)果與Sanger測序結(jié)果一致，準(zhǔn)確性為100％。
　　2、采用多重單堿基引物延伸法對96名非綜合征型耳聾先證者進(jìn)行GJB2、G

5、JB3、SLC26A4、12SrRNA基因12個熱點突變位點的一次性檢測，大大提高了檢出率，檢出率為41.67％，而前期單個基因/單個位點的一次性檢出率只有31.25％。
　　3、50名正常人中有1名攜帶GJB2 c.235delC，正常人中攜帶率為2％，與國內(nèi)研究顯示的正常人群攜帶率在1％～6％之間相符。
　　結(jié)論:建立了一種可以一次性檢測非綜合征型耳聾GJB2、GJB3、SLC26A4、12SrRNA基因12個熱點突變位