BMP9通過ERK5信號通路調控根尖牙乳頭干細胞成骨-成牙本質分化.pdf

1、目的：
　　研究BMP9是否可以通過激活ERK5信號通路調控iSCAP細胞成骨／成牙本質分化。
　　方法：
　　首先，實驗分為四組，空白組，GFP控制組，BMP9陽性對照組和BMP+BIX02189實驗組。然后采用 Western Blot實驗檢測Ad-BMP9轉染iSCAP后ERK5蛋白的磷酸化水平變化及其加入ERK5抑制劑BIX02189后的變化；采用堿性磷酸酶（ALP）染色方法檢驗早期成骨／成牙本質標志物的變化；

2、RT-PCR分析成骨／成牙本質相關基因Runx2、骨鈣蛋白、骨橋蛋白和牙本質基質蛋白1的mRNA表達水平的變化。最后茜素紅染色觀察鈣鹽沉積程度來檢測晚期成骨／成牙本質標志物的變化。
　　結果：
　　（1）BMP9可以上調iSCAP中P-ERK5的表達水平，證實BMP9-ERK5通路存在于iSCAP細胞成骨/成牙本質分化過程中；
　　（2）在ERK5抑制劑BIX02189作用下，iSCAP細胞中ERK5的磷酸化表達下降顯

3、著，但ERK5總蛋白表達量變化不明顯；
　?。?）ALP染色實驗發(fā)現(xiàn)加入抑制劑的實驗組iSCAP細胞中的ALP陽性染色比BMP9組明顯降低；
　?。?）RT-PCR檢測的成骨／成牙本質相關基因Runx2、骨鈣蛋白、骨橋蛋白和牙本質基質蛋白1的轉錄水平顯示加入抑制劑的實驗組其表達也受到了抑制；
　?。?）茜素紅染色同樣發(fā)現(xiàn)抑制劑組鈣鹽沉積顆粒比BMP9組顯著減少；
　?。?）通過一系列體外細胞實驗從早/中/晚期成骨