犬根尖牙乳頭干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定.pdf

1、分類號：密級：UDC：學(xué)號：416524012303南昌大學(xué)專業(yè)學(xué)位研究生南昌大學(xué)專業(yè)學(xué)位研究生學(xué)位論文犬根尖牙乳頭干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定犬根尖牙乳頭干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定Isolationcultivationidentificationofstemcellfromapicalpapillaofcanine賀露培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)附屬口腔醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：楊健主任醫(yī)師教授專業(yè)學(xué)位種類：口腔醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)領(lǐng)域名稱：口腔醫(yī)學(xué)論

2、文答辯日期：2015年6月答辯委員會主席：評閱人：2015年6月摘要II摘要目的目的采用組織塊培養(yǎng)法從犬年輕恒牙根尖牙乳頭組織中分離培養(yǎng)出根尖牙乳頭干細(xì)胞（stemcellfromapicalpapilla，SCAP)，探索其自我更新和多向分化能力，為SCAP的進(jìn)一步研究應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。方法方法拔除犬健康年輕恒牙獲取根尖牙乳頭組織，采用組織塊培養(yǎng)法分離培養(yǎng)犬根尖牙乳頭細(xì)胞，詳細(xì)觀察、記錄細(xì)胞的形態(tài)和生長特性；流式細(xì)胞術(shù)鑒定干細(xì)胞表面標(biāo)記物

3、；進(jìn)行平板克隆形成實驗；細(xì)胞免疫熒光鑒定胞漿蛋白；體外進(jìn)行成骨、成脂誘導(dǎo)分化及鑒定。結(jié)果結(jié)果采用組織塊培養(yǎng)法可從根尖牙乳頭組織中分離培養(yǎng)出貼壁的短梭形或星形的成纖維樣細(xì)胞，自我增殖能力強，克隆成形率為（116.8312.608）600非常高。間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記分子STRO1、CD90、CD24表達(dá)陽性，但是CD34表達(dá)陰性。胞漿中巢蛋白（Nestin），波形蛋白（Vimentin）表達(dá)陽性、牙本質(zhì)涎蛋白（dentinsialoprot

4、ein，DSP）表達(dá)陰性或極弱陽性。成骨誘導(dǎo)分化后可見礦化結(jié)節(jié)，堿性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP），DSP表達(dá)陽性，成脂誘導(dǎo)分化后形成脂滴；誘導(dǎo)分化后經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reversetranionpolymerasechainreaction，RTPCR)分析表明特征性分化標(biāo)記分子骨唾蛋白（bonesialoproteinBSP）、DSP、RUNX2、脂蛋白脂酶（lipoproteinlipase，LPL）