顳下頜關(guān)節(jié)盤前移位后髁突軟骨與雙板區(qū)適應(yīng)性改建的機(jī)制研究.pdf

1、顳下頜關(guān)節(jié)紊亂病是口腔外科臨床的常見病，關(guān)節(jié)盤前移位(anteriordiscdisplacement，ADD)是其中最常見的類型。然而，研究表明并非所有ADD個(gè)體都會發(fā)生顳下頜關(guān)節(jié)癥狀。對一些有癥狀的關(guān)節(jié)盤移位患者在不恢復(fù)關(guān)節(jié)盤正常解剖位置的情況下進(jìn)行保守治療亦可達(dá)良好的療效。 顳下頜關(guān)節(jié)是人體內(nèi)保持較強(qiáng)終身改建能力的負(fù)重關(guān)節(jié)。關(guān)節(jié)盤移位后，因?yàn)榫植苛W(xué)環(huán)境的改變，作為關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)的兩個(gè)主要承力區(qū)的髁突和關(guān)節(jié)盤可以發(fā)生一系列的適應(yīng)

2、性改建以適應(yīng)新的盤突關(guān)系。研究表明關(guān)節(jié)盤移位的早期，髁突軟骨基質(zhì)有降解，但隨著時(shí)間的延長能逐漸恢復(fù)；而在前移位的雙板區(qū)則有越來越多的軟骨細(xì)胞出現(xiàn)并可見軟骨組織形成，發(fā)生類盤樣變。本研究分兩部分通過免疫組化，原位雜交法對關(guān)節(jié)盤移位前后髁突軟骨中c-fosmRNA及蛋白，TGF-β1及BMP-2，OPG/OPGL的檢測和RT-PCR，western-blot法對雙板區(qū)TGF-β1mRNA、BMP-2mRNA及P38、JNK活化情況的檢測，對

3、上述顳下頜關(guān)節(jié)適應(yīng)性改建機(jī)制作一初步探討。 第一部分關(guān)節(jié)盤前移位后髁突軟骨適應(yīng)性改建的機(jī)制研究方法：33只日本大耳白兔，25只用于建立關(guān)節(jié)盤前移位的動(dòng)物模型，分別于術(shù)后1、2、4、8，12周處死，5只行模擬手術(shù)作為手術(shù)對照組，另3只不行手術(shù)作為空白對照。HE染色觀察其鏡下結(jié)構(gòu)，原位雜交及免疫組化法分別檢測髁突軟骨中c-fos基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)水平。免疫組化法檢測髁突軟骨中TGF-β1，BMP-2，OPG與OPGL的表達(dá)與分布。FJ

4、Y計(jì)算機(jī)彩色圖像分析系統(tǒng)計(jì)算染色灰度值，并運(yùn)用單因素方差法及t檢驗(yàn)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組關(guān)節(jié)盤成功前移位。對照組c-fosmRNA及蛋白無表達(dá)或表達(dá)水平很低，關(guān)節(jié)盤移位1-2周后，c-fos轉(zhuǎn)錄及表達(dá)水平明顯增強(qiáng)(P＜0.05)，4周開始回落，8-12周后c-fos轉(zhuǎn)錄及表達(dá)基本恢復(fù)正常水平。 對照組TGF-β1染色強(qiáng)度中等，主要位于髁突軟骨肥大層及鈣化軟骨層，BMP-2表達(dá)較弱，主要位于髁突增殖層及過渡層。關(guān)

5、節(jié)盤移位后，TGF-β1和BMP-2表達(dá)逐漸增強(qiáng)，陽性細(xì)胞逐漸增多，染色灰度值與對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)。8-12周時(shí)髁突軟骨全層細(xì)胞幾乎都表達(dá)TGF-β1和BMP-2。 OPG和OPGL在對照組髁突軟骨中表達(dá)水平較弱，關(guān)節(jié)盤移位后OPG、OPGL染色明顯增強(qiáng)，染色灰度值與對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)，關(guān)節(jié)盤移位前后OPG/OPGL比值基本穩(wěn)定(P＞0.05)。 第二部分關(guān)節(jié)盤前移位后雙板區(qū)適應(yīng)性

6、改建的機(jī)制研究方法：28只日本大耳白兔，20只用于建立關(guān)節(jié)盤前移位的動(dòng)物模型，分別于術(shù)后1、2、4、8周處死，5只行模擬手術(shù)作為手術(shù)對照組，另3只不行手術(shù)作為空白對照。取雙板區(qū)組織，分成兩部分，一部分提取總RNA，RT-PCR法檢測顳下頜關(guān)節(jié)雙板區(qū)中TGF-β1與BMP-2mRNA的表達(dá)水平。另一部分提取蛋白，通過western-blot法檢測顳下頜關(guān)節(jié)雙板區(qū)P-P38，P38，P-JNK，JNK的蛋白含量，分析關(guān)節(jié)盤移位前后P38，J

7、NK的活化程度。 結(jié)果：對照組TGF-β1和BMP-2mRNA表達(dá)水平較低，關(guān)節(jié)盤移位1-2周后，TGF-β1和BMP-2mRNA明顯增強(qiáng)(P＜0.05)，4周時(shí)BMP-2mRNA的表達(dá)量達(dá)到高峰，8周時(shí)BMP-2mRNA略有回落，但TGF-β1mRNA的表達(dá)水平持續(xù)增強(qiáng)。 關(guān)節(jié)盤移位后1周時(shí)P38活化較對照組即開始增加，2-4周組P38活化程度繼續(xù)增強(qiáng)，8周組有所回落，但較對照組仍有明顯增強(qiáng)。關(guān)節(jié)盤移位前后JNK-1均

8、未見明顯活化，JNK-2也只在移位的早期1，2周時(shí)輕度活化。 結(jié)論1.關(guān)節(jié)盤前移位的早期髁突軟骨c-fos基因轉(zhuǎn)錄與表達(dá)水平即明顯升高，c-fos可能在關(guān)節(jié)盤移位后髁突軟骨的改建過程中發(fā)揮著重要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用。 2.關(guān)節(jié)盤前移位后髁突軟骨TGF-β1和BMP-2的分布及含量都發(fā)生了改變，這種改變與關(guān)節(jié)盤前移位后的病程進(jìn)展相適應(yīng)。提示TGF-β1和BMP-2可能介導(dǎo)了關(guān)節(jié)盤移位后疾病發(fā)展過程中機(jī)械刺激對髁突的改建作用。

9、 3.關(guān)節(jié)盤前移位后髁突軟骨OPG和OPGL能協(xié)調(diào)表達(dá)，這對于維持髁突軟骨的代謝平衡有重要意義，OPG和OPGL可能參與了關(guān)節(jié)盤移位后髁突軟骨病變的發(fā)展及轉(zhuǎn)歸。 4.關(guān)節(jié)盤前移位后雙板區(qū)TGF-β1和BMP-2mRNA水平升高，它們可能能促進(jìn)雙板區(qū)滑膜或其它組織內(nèi)的細(xì)胞向軟骨細(xì)胞方向分化，參與雙板區(qū)的適應(yīng)性改建。 5.關(guān)節(jié)盤前移位后雙板區(qū)P38活化程度明顯增強(qiáng)，而JNK無明顯活化。在雙板區(qū)的適應(yīng)性改建過程中，JNK通路