微小RNA-27b過表達(dá)對殘粒脂蛋白誘導(dǎo)的小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞衰老的影響.pdf

1、內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells，EPCs)是血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，有保持血管內(nèi)皮細(xì)胞完整和維持正常血管內(nèi)皮功能的作用。EPCs的衰老和數(shù)量減少與冠心病等缺血性心腦血管疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。p16INK4α是調(diào)控干/祖細(xì)胞衰老的重要轉(zhuǎn)錄因子。餐后高甘油三酯血癥患者血漿中的殘粒脂蛋白（remnant-likeparticles，RLPs）能夠誘導(dǎo)人外周血來源的EPCs衰老，劑量依賴性地上調(diào)p16I

2、NK4α的蛋白水平。微小RNA(microRNA，miRNA/miR)是一類高度保守的、由18～22個(gè)核苷酸構(gòu)成的非編碼單鏈RNA，在轉(zhuǎn)錄后水平負(fù)向調(diào)控靶基因的表達(dá)。已知人RLPs可促進(jìn)小鼠EPCs的衰老，伴miR-27b表達(dá)顯著下調(diào)。由此推測miR-27b可能參與調(diào)控RLPs誘導(dǎo)的小鼠EPCs衰老。
　　目的：用miR-27b模擬物(mimic)轉(zhuǎn)染小鼠骨髓來源EPCs，觀察miR-27b過表達(dá)對RLPs誘導(dǎo)的EPCs衰老過程的

3、影響。
　　方法：密度梯度離心法提取小鼠雙下肢骨髓單個(gè)核細(xì)胞，4天后棄去未貼壁細(xì)胞。用EBM-2完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至第7天后，將細(xì)胞分為miR-27b過表達(dá)組和對照組，分別轉(zhuǎn)染miR-27b mimic及其對照物，24h后用0.2mg/mL的RLPs同時(shí)干預(yù)兩組細(xì)胞。24h后行衰老相關(guān)-β-半乳糖苷酶(senescense associated-β-galactosidase，SA-β-Gal)染色、分別計(jì)數(shù)兩組衰老細(xì)胞百分率;提取總

4、RNA，測定兩組細(xì)胞中miR-27b、衰老相關(guān)基因p16INK4α的mRNA水平。
　　結(jié)果：成功分離培養(yǎng)出小鼠骨髓源性EPCs，使miR-27b在EPCs中表達(dá)水平顯著上調(diào)37倍。miR-27b過表達(dá)組的衰老細(xì)胞百分率為29.4％，對照組為21.4％。miR-27b過表達(dá)組的衰老相關(guān)基因p16INK4α的mRNA水平低于對照組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。
　　結(jié)論：miR-27b過表達(dá)可能對RLPs誘導(dǎo)的小鼠骨髓源性EPCs衰老起