AMPA受體GluR2膜轉(zhuǎn)位在丙泊酚后處理急性腦保護(hù)中的變化及PI3K的調(diào)控作用.pdf

1、目的:丙泊酚是目前最為常用的靜脈麻醉藥，能夠降低腦氧代謝率、顱內(nèi)壓，且具有抗氧化和抑制細(xì)胞凋亡的作用，從而能夠減輕腦缺血再灌注損傷。在前期實(shí)驗(yàn)中，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)丙泊酚后處理對(duì)大鼠腦缺血再灌注具有保護(hù)作用，且這一作用與α-氨基-3-羥基-5-甲基-4-異惡唑丙酸（amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionic acid，AMPA）受體GluR2亞基在突觸后膜的穩(wěn)定表達(dá)和PI3K(phosphoin

2、ositide-3-kinase)-Akt通路活化有關(guān)，但關(guān)于PI3K與AMPA受體GluR2亞單位之間是否存在聯(lián)系及其上下游調(diào)控機(jī)制尚不明確。本研究旨在觀察丙泊酚后處理腦保護(hù)作用中PI3K與AMPA受體GluR2亞單位相互作用方式及其上下游關(guān)系，從而為臨床腦缺血及其高危人群麻醉藥物的合理選擇提供理論依據(jù)。
　　 方法:雄性SD大鼠168只，體重260-280g，隨機(jī)分為6組，每組28只，分別為假手術(shù)組（S組）、缺血再灌注組（I

3、R組）、缺血再灌注+丙泊酚后處理組（P組）、假手術(shù)+PI3K抑制劑wortmannin組（W+S組）、缺血再灌注+PI3K抑制劑wortmannin組（W+IR組）、缺血再灌注+PI3K抑制劑wortmannin+丙泊酚后處理組（W+P組）。采用MCAO方法制作大腦中動(dòng)脈栓塞模型，栓塞大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈60min后施行再灌注。P組大鼠于再灌注即刻經(jīng)股靜脈恒速泵入丙泊酚（20mg· kg-1· h-1，2h）;應(yīng)用抑制劑組于再灌注前30m

4、in腹腔注射wortmannin0.6 mg·kg-1。術(shù)后12、24h進(jìn)行改良神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分(modified neurologicalseverity score，mNSS)及腦梗死體積測(cè)定;術(shù)后6h取腦片免疫金銀染色觀察含有GluR2的AMPA受體的運(yùn)輸情況;6、12和24h取缺血側(cè)海馬，免疫共沉淀法檢測(cè)PI3K-AMPA受體GluR2亞單位復(fù)合物共表達(dá);Western Blot法檢測(cè)GluR2亞單位及pGluR2亞單位在缺血側(cè)海

5、馬細(xì)胞的表達(dá)情況;ELISA法測(cè)定PI3K活性變化。
　　 結(jié)果:缺血再灌注損傷后24 h，與IR組相比，P組mNSS評(píng)分、腦梗死體積在各時(shí)間點(diǎn)均明顯降低。同時(shí)與IR組相比，P組缺血側(cè)海馬PI3K活性升高，PI3K-AMPA受體GluR2亞單位復(fù)合物表達(dá)增強(qiáng)，pGluR2表達(dá)降低，而電鏡結(jié)果顯示位于突觸后膜的GluR2表達(dá)量明顯升高（均P＜0.01）。而與IR組相比，W+IR組的各項(xiàng)結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。與P組相比

6、，W+P組mNSS評(píng)分、腦梗死體積在各時(shí)間點(diǎn)均成升高趨勢(shì)，而缺血側(cè)海馬PI3K活性降低及PI3K-AMPA受體GluR2亞單位復(fù)合物表達(dá)減少，pGluR2表達(dá)上升，而位于突觸后膜的GluR2表達(dá)量明顯降低(P＜0.01或P＜0.05)。
　　 結(jié)論:丙泊酚后處理對(duì)局灶性缺血再灌注損傷大鼠具有急性保護(hù)作用，其機(jī)制可能為丙泊酚后處理(20mg·kg-1·h-1，2h)使得缺血側(cè)海馬PI3K活性升高，活化的PI3K與AMPA受體結(jié)合，