抑制Cdc6表達(dá)可提高非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H460對(duì)化療藥物的敏感性.pdf

1、背景：
　　我國(guó)是肺癌高發(fā)的國(guó)家，其發(fā)病率和病死率都呈上升的趨勢(shì)，其中80％為非小細(xì)胞肺癌（NSCLC），早期診斷困難，絕大部分已失去了手術(shù)的機(jī)會(huì),化療是晚期 NSCLC患者的主要治療手段之一。但是化療耐藥往往使得肺癌的治療效果不佳，生存率并沒有得到明顯的提高。大部分化療藥物是通過特異性或非特異性地作用于細(xì)胞周期某一特定位點(diǎn)，起到殺死腫瘤細(xì)胞的目的。Cdc6是細(xì)胞周期調(diào)控主要因子之一，它的異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有一定的關(guān)系。那么

2、，干擾Cdc6的表達(dá)，是否能夠提高化療藥物對(duì)肺癌的敏感性呢？
　　方法：
　　通過 western blot和Q-PCR的方法，檢測(cè)了非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株 H460、A549、SPC-A-1、NCI-H520中Cdc6的蛋白和基因表達(dá)情況。最后選取表達(dá)量最高的H460細(xì)胞株用于后續(xù)的干擾和藥敏實(shí)驗(yàn)。首先用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方法導(dǎo)入Cdc6-siRNA，并通過western blot和Q-PCR的方法驗(yàn)證Cdc6蛋白和基因表達(dá)的抑制情況

3、。同時(shí)，也分別導(dǎo)入miR26a及miR26b的模擬物，觀察Cdc6蛋白和基因表達(dá)的抑制情況。抑制Cdc6的表達(dá)后，用MTT的方法，比較干擾前后H460對(duì)化療藥物吉西他濱和多烯紫杉醇敏感性的變化。
　　結(jié)果：
　　在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549、H460、NCI-H520中Cdc6的蛋白和基因都呈高表達(dá)，且呈正相關(guān)。其中H460細(xì)胞株中Cdc6的表達(dá)量最高。H460細(xì)胞株轉(zhuǎn)染Cdc6-siRNA后，蛋白和基因的表達(dá)水平都有明顯的

4、下降。同時(shí)我們也發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)入miR26a及miR26b的模擬物后，Cdc6的蛋白和基因水平也有明顯下降，與轉(zhuǎn)染Cdc6-siRNA后起到相關(guān)的作用效果。Cdc6表達(dá)的下降后，期對(duì)化療藥物吉西他濱和多烯紫杉醇的IC50有明顯的下降，及藥物的敏感性有明顯的提高，結(jié)果都具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　本研究發(fā)現(xiàn) Cdc6在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株中呈高表達(dá)趨勢(shì)。下調(diào) Cdc6的表達(dá)后，非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株H460