大鼠重癥急性胰腺炎繼發(fā)性肝、肺損傷模型的建立及相關(guān)炎癥因子研究.pdf

1、目的:(1)通過(guò)夾閉胰頭部的方法建立一種新型大鼠重癥急性胰腺炎相關(guān)性肝損傷的動(dòng)物模型(2)通過(guò)夾閉胰頭部的方法建立一種新型大鼠重癥急性胰腺炎相關(guān)性肺損傷的動(dòng)物模型。(3)觀察大鼠重癥急性胰腺炎繼發(fā)性肺損傷肺組織中低氧誘導(dǎo)因子1αmRNA、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶mRNA、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、髓過(guò)氧化物酶(MPO)的變化情況,探討HIF-1α、iNOS、NO在SAP-LI中的作用,以便為SAP-LI的診治提供理論基礎(chǔ)。
　

2、　方法:(1)將SPF級(jí)健康雄性SD大鼠180只隨機(jī)分為:對(duì)照組、假手術(shù)組、肝損傷模型組,每組60只。再分別將每個(gè)分組中的60只大鼠隨機(jī)分為6個(gè)分組,包括0h、6h、12h、18h、24h、36h組,每組10只大鼠。肝損傷模型組用16cm彎止血鉗夾閉胰頭2小時(shí)后松開(kāi)。同時(shí)在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)建立對(duì)照組及假手術(shù)組。在造模完成后,分別于相應(yīng)各時(shí)間點(diǎn)采集血液、肝臟組織、胰腺組織標(biāo)本。行血清淀粉酶(serumamylase,AMY)、血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移

3、酶(alanineaminotransferase,ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartateaminotransferase,AST)、血液中性粒細(xì)胞百分比檢測(cè),行肝臟組織、胰腺組織病理學(xué)觀察。(2)將SPF級(jí)健康雄性SD大鼠210只隨機(jī)分為:對(duì)照組、假手術(shù)組、重癥急性胰腺炎相關(guān)性肺損傷模型組,每組70只。再分別將每個(gè)分組中的70只大鼠隨機(jī)分為7個(gè)分組,包括0h、6h、12h、18h、24h、36h、48h組,每組10只大鼠。

4、SAP-LI模型組用16cm彎止血鉗夾閉胰頭2h后松開(kāi)。假手術(shù)組于相應(yīng)各時(shí)間點(diǎn)開(kāi)腹后,僅輕輕翻動(dòng)胰腺10次后放回其解剖位置。正常對(duì)照組除麻醉3h外不做任何處理。在造模完成后,分別于相應(yīng)各時(shí)間點(diǎn)采集血液、肺泡灌洗液、肺組織、胰腺組織標(biāo)本。行血淀粉酶、總蛋白、中性粒細(xì)胞百分比檢測(cè),行大鼠肺組織濕/干重比,肺泡灌洗液蛋白檢測(cè),行肺組織、胰腺組織病理學(xué)觀察。(3)將210只SPF級(jí)健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為:對(duì)照組、假手術(shù)組、SAP-LI模型組,

5、每組70只。再將每組中的70只大鼠隨機(jī)分為7個(gè)分組,包括0h、6h、12h、18h、24h、36h、48h組,每組10只大鼠。SAP-LI模型組采用夾閉法建模。造模完成后,分別于相應(yīng)各時(shí)間點(diǎn)采集血液、肺泡灌洗液、肺組織標(biāo)本。行血漿總蛋白檢測(cè),行大鼠肺組織濕/干重比,肺泡灌洗液蛋白檢測(cè),行肺組織HIF-1mRNA、iNOSmRNAqRT-PCR檢測(cè)及NO、MDA、MPO檢測(cè),行肺組織病理學(xué)觀察。
　　結(jié)果:(1)肝損傷模型組大鼠AM

6、Y12h[(5052.1±114.9)U/L]、中性粒細(xì)胞百分比值在12h[(75.2±5.8)％]、ALT12h[(52.6±5.9)U/L]、AST12h[(629.5±57.4)]達(dá)到峰值,均顯著高于其它時(shí)間點(diǎn)組(P<0.05)。肝損傷模型組與對(duì)照組和假手術(shù)組同一時(shí)間點(diǎn)組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05)。病理組織學(xué)觀察可見(jiàn)造模后隨時(shí)間進(jìn)程胰腺炎呈加重表現(xiàn),肝組織損傷24h最重。肝損傷模型組血清淀粉酶與血液中性粒細(xì)胞百分比、

7、ALT、AST呈正相關(guān)(r=0.796,P<0.01;r=0.710,P<0.01;r=0.875,P<0.01)。胰腺病理學(xué)評(píng)學(xué)與肝臟病理學(xué)評(píng)分呈正相關(guān)(rs=0.919,P<0.01)。(2)SAP-LI模型組大鼠血清淀粉酶12h(5052.1U/L±114.9U/L,P<0.01)、中性粒細(xì)胞百分比值12h(75.2%±5.8%,P<0.05)達(dá)到峰值,大鼠肺灌洗液蛋白與血清蛋白比值36h(0.009021±0.000107,P<

8、0.01)達(dá)到高峰;大鼠肺組織濕/干重比36h(1.2001±0.0443,P<0.01)達(dá)到最小值。SAP-LI模型組與對(duì)照組和假手術(shù)組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05)。病理組織學(xué)觀察可見(jiàn)造模后隨時(shí)間進(jìn)程胰腺炎呈加重表現(xiàn),肺組織損傷36h最重。SAP-LI模型組血清淀粉酶與血液中性粒細(xì)胞百分比、肺濕干質(zhì)量比均呈正相關(guān)(r=0.794,P<0.01;r=0.365,P=0.002)。中性粒細(xì)胞百分比與肺濕干質(zhì)量比呈正相關(guān)(r=

9、0.356,P=0.003)。肺濕干質(zhì)量比、肺灌洗液蛋白與血清蛋白比值呈負(fù)相關(guān)(r=-0.717,P<0.01)。胰腺病理學(xué)評(píng)分與肺臟病理學(xué)評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.934,P<0.01)。(3)SAP-LI模型組大鼠肺灌洗液蛋白與血清蛋白比值36h(0.009021±0.000107,P<0.01)達(dá)到高峰;大鼠肺組織濕/干重比36h(1.2001±0.0443,P<0.01)達(dá)到最小值。肺組織中HIF-1αmRNA(0.020279±0

10、.000625,P<0.01)、iNOSmRNA(0.029780±0.000498,P<0.01)的相對(duì)表達(dá)量及NO(7.505±0.481,P<0.01)含量24h達(dá)到最高值,MDA(6.819±0.810,P<0.01)、MPO(5.089±0.523,P<0.05)含量36h達(dá)到峰值。SAP-LI模型組與對(duì)照組和假手術(shù)組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05)。病理組織學(xué)觀察可見(jiàn)肺組織損傷36h最重。肺濕干質(zhì)量比、肺灌洗液蛋白

11、與血清蛋白比值呈負(fù)相關(guān)(r=-0.717,P<0.01)。肺濕干質(zhì)量比和MPO、MDA呈負(fù)相關(guān)(r=-0.636,P<0.01;r=-0.497,P<0.01)。MDA和肺灌洗液蛋白與血清蛋白比值呈正相關(guān)(r=0.661,P<0.01)。NO和MPO、MDA、iNOS、HIF-1α、肺灌洗液蛋白與血清蛋白比值呈正相關(guān)(r=0.721,P<0.01;r=0.529,P<0.01;r=0.695,P<0.01;r=0.642,P<0.01;

12、r=0.781,P<0.01)。HIF-1α和MPO、iNOS、MDA、肺灌洗液蛋白與血清蛋白比值呈正相關(guān)(r=0.387,P<0.01;r=0.99,P<0.01;r=0.269,P<0.05;r=0.413,P<0.01)。iNOS和MPO、MDA、肺灌洗液蛋白與血清蛋白比值呈正相關(guān)(r=0.457,P<0.01;r=0.323,P<0.01;r=0.495,P<0.01)。MPO與MDA、肺灌洗液蛋白與血清蛋白比值呈正相關(guān)(r=0

13、.595,P<0.01;r=0.884,P<0.01)。
　　結(jié)論:(1)通過(guò)夾閉胰頭部的方法建立了一種新型大鼠重癥急性胰腺炎相關(guān)性肝損傷的動(dòng)物模型,24h為肝損傷最嚴(yán)重的時(shí)間點(diǎn),也是我們建模的最佳時(shí)間點(diǎn).為急性壞死性胰腺炎致肝損傷的發(fā)病機(jī)制及藥物干預(yù)研究提供了一種較為理想的動(dòng)物模型。(2)通過(guò)夾閉胰頭部的方法建立了一種新型大鼠重癥急性胰腺炎致肺損傷動(dòng)物模型,36h為肺損傷最嚴(yán)重的時(shí)間點(diǎn),也是我們建模的最佳時(shí)間點(diǎn)。為重癥急性胰腺炎

14、致肺損傷的發(fā)病機(jī)制及藥物干預(yù)研究提供了一種較為理想的動(dòng)物模型。(3)大鼠重癥急性胰腺炎繼發(fā)性肺損傷36h損傷最重,肺組織MDA、MPO檢測(cè)值36h最高,HIFmRNA、iNOSmRNA含量及NO檢測(cè)值24h最高,由此推測(cè)HIF-1α參與了肺損傷早期過(guò)程,iNOS及NO間接性致傷作用占主導(dǎo)地位。HIF-1α、NO、iNOS與中性粒細(xì)胞活性、脂質(zhì)過(guò)氧化程度、及SAP-LI蛋白滲出有關(guān)。中性粒細(xì)胞活性與脂質(zhì)過(guò)氧化程度有關(guān)。中性粒細(xì)胞活性、過(guò)氧